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本研究针对异体CAR-T细胞疗法面临的免疫排斥和持久性难题，创新性地通过CRISPR筛选发现SPPL3基因缺失可重塑T细胞表面糖基化模式，形成"糖基化屏蔽"效应。该技术既能降低TCR介导的移植物抗宿主病(GvHD)风险，又保留TCR信号对细胞持久性的关键作用，在9例B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者中实现100%客观缓解率(ORR)，为通用型CAR-T开发提供了新策略。
在肿瘤免疫治疗领域，自体CAR-T细胞疗法虽取得显著成效，但存在制备周期长、成本高等瓶颈。而异体CAR-T疗法又面临双重挑战：宿主免疫系统对输注细胞的排斥（宿主抗移植物反应，HvG），以及CAR-T细胞对宿主组织的攻击（移植物抗宿主病，GvHD）。传统解决方案是通过基因编辑删除T细胞受体(TCR)，但这可能导致细胞持久性不足。如何破解这个"鱼与熊掌不可兼得"的困局，成为领域内亟待解决的科学难题。
Zeguang Wu、Jinhong Shi等研究团队在《Cell》发表的这项研究，通过创新性的基因组筛选和临床转化，提出了"糖基化屏蔽"的全新解决方案。研究人员首先设计了三套CRISPR筛选体系：通过HLA-ABC低表达筛选逃避T细胞识别的靶点，通过NK细胞杀伤实验筛选逃避天然免疫的靶点，以及通过FasL诱导凋亡筛选抵抗激活诱导细胞死亡(AICD)的靶点。交叉分析发现，信号肽肽酶样3(SPPL3)基因的缺失能同时满足这三重需求。
关键技术包括：1）基于多条形码的全基因组CRISPR筛选系统；2）临床级SPPL3KO/TCRKO抗CD19 CAR-T细胞的GMP制备；3）9例复发/难治性B-NHL患者的I期临床试验（NCT06014073）；4）3例同情使用病例的TCR保留型治疗方案评估。研究团队还创新性地采用反向转化研究策略，通过小鼠模型验证TCR信号对细胞持久性的关键作用。
研究结果部分：
通过全基因组筛选发现，SPPL3缺失可同时降低HLA-ABC表达（减少T细胞识别）、增强对NK细胞杀伤的抵抗（缺失"自我"识别信号）、抑制FasL介导的凋亡。特别值得注意的是，SPPL3KO细胞在三种筛选体系中均显著富集，提示其多重保护机制。
实验证实SPPL3KO T细胞对FasL诱导的凋亡具有显著抗性，其机制是糖基化修饰阻碍了Fas-FasL结合。在混合淋巴细胞反应(MLR)中，SPPL3KO细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力降低50%，且对NY-ESO-1特异性TCR-T细胞的杀伤具有抵抗力。有趣的是，尽管HLA-ABC表达降低，SPPL3KO细胞却意外地抵抗NK细胞杀伤，这与B2M敲除细胞的表现截然不同。
质谱分析揭示SPPL3缺失导致N-乙酰乳糖胺(LacNAc)和唾液酸含量增加，而甘露糖水平降低。这种"糖基化重编程"选择性地影响了TCR/CD3复合物的糖型（增加6种新糖型），但对CAR分子的检测无影响，实现靶向特异性的精准调控。
转录组分析显示SPPL3编辑不影响CAR-T细胞的核心功能通路。体外实验证实SPPL3KO/TCRKO抗CD19 CAR-T细胞保持强大的肿瘤杀伤能力，且在反复抗原刺激下展现出增殖优势。
小鼠模型证实，SPPL3编辑的CAR-T细胞能有效控制肿瘤并延长生存期。在肿瘤再攻击实验中，SPPL3KO细胞表现出更强的扩增能力，提示糖基化修饰可增强细胞持久性。
关键临床数据显示，9例接受治疗的患者中3例出现≥3级细胞因子释放综合征(CRS)，但无一例发生GvHD。客观缓解率(ORR)达100%，完全缓解(CR)率66.7%。值得注意的是，尽管输注产品中CD3+细胞<0.3%，7例患者出现残留CD3+ CAR-T细胞的显著扩增，其峰值超过异体移植中诱发GvHD的阈值（2×105/kg），但仅表现为自限性皮疹。
3例同情使用病例进一步验证，TCR保留型SPPL3KO CAR-T在完全HLA不匹配（0/12）情况下仍安全有效。其中1例混合谱系白血病(MLL)重排B-ALL患者获得微小残留病(MRD)阴性缓解，且CAR-T细胞在骨髓中持续检出达6个月。
研究结论部分，作者提出"双向同种异体T细胞反应综合征"(BATCRS)的新概念，解释观察到的自限性免疫反应现象。这项研究的突破性意义在于：1）首次证实通过单一基因编辑可实现多重免疫逃避；2）阐明TCR信号对细胞持久性的关键作用，颠覆了"必须删除TCR"的传统认知；3）建立"糖基化屏蔽"的通用型CAR-T开发新范式。该技术路线已进行专利布局，为肿瘤免疫治疗提供了更优的解决方案。
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