FAM135B通过稳定IFI16激活STING通路增强三阴性乳腺癌免疫治疗疗效的机制研究

本文揭示了FAM135B通过竞争性结合IFI16的PYRIN结构域，阻断TRIM21介导的K143/K561位点泛素化降解，从而激活STING-Ⅰ型干扰素通路，促进细胞毒性CD8+T细胞浸润与活化。该机制为三阴性乳腺癌（TNBC）的免疫检查点阻断（ICB）治疗提供了新型生物标志物与联合治疗策略。

FAM135B表达与T细胞浸润的临床相关性

基因组学分析显示，在三阴性乳腺癌（TNBC）样本中FAM135B突变率为4%，提示其参与TNBC肿瘤发生。转录组数据表明，FAM135B在TNBC组织中表达显著低于正常组织及非TNBC肿瘤组织。免疫细胞浸润分析发现，FAM135B高表达与CD8⁺T细胞、NK细胞浸润呈正相关，而与M2型巨噬细胞富集呈负相关。单细胞RNA测序进一步证实，FAM135B^high肿瘤中CD4⁺、CD8⁺T细胞及B细胞比例上升，髓系细胞比例下降。效应记忆T细胞（Tem）在FAM135B^high组中比例增加，衰竭T细胞减少，且Tem细胞中T细胞增殖、活化、细胞毒性相关基因显著富集。组织免疫染色显示FAM135B蛋白水平与CD8⁺T细胞浸润程度正相关。

FAM135B过表达通过激活细胞毒性T细胞抑制肿瘤生长

体外实验表明，在TNBC细胞（BT549、MDA-MB-231）中过表达FAM135B可显著提升与活化T细胞共培养体系中的CD8⁺T细胞比例及颗粒酶B（GZMB）⁺CD8⁺T细胞数量，该效应在非TNBC细胞中未出现。小鼠体内实验证实，FAM135B过表达可抑制免疫健全BALB/c小鼠的肿瘤生长，但在裸鼠中无此效果，说明T细胞介导了该抗肿瘤作用。流式细胞术与免疫组化分析显示，FAM135B过表达增加了肿瘤内CD8⁺T细胞浸润及GZMB表达，并降低肿瘤增殖标志物Ki67。

FAM135B激活STING-Ⅰ型干扰素通路

RNA测序与富集分析表明，FAM135B过表达显著激活干扰素α/β信号通路与STING通路。分子实验证实FAM135B上调STING通路关键分子（TBK1、IRF3、STING）的磷酸化水平，促进IRF3核转位。机制上，FAM135B与DNA感受器IFI16直接结合，并通过其PGAP1/DUF3657结构域竞争性阻断E3泛素连接酶TRIM21对IFI16的K33连锁泛素化（主要作用于K143、K561位点），从而抑制IFI16的蛋白酶体降解，增强其稳定性。

FAM135B与TRIM21竞争性调节IFI16稳定性

质谱分析与免疫共沉淀验证了FAM135B-IFI16-TRIM21三元相互作用。FAM135B过表达可抑制TRIM21介导的IFI16泛素化，延长其半衰期。点突变实验证明IFI16的K143R/K561R突变体可抵抗TRIM21的降解作用，且能逆转FAM135B缺失导致的STING通路抑制。体内外实验均显示，STING抑制剂H-151可抵消FAM135B过表达引发的抗肿瘤免疫激活效应。

FAM135B增强免疫检查点阻断疗效

在TNBC小鼠模型中，FAM135B过表达联合抗PD-1治疗可几乎完全抑制肿瘤生长，显著优于单药治疗。临床样本分析显示，FAM135B高表达的TNBC患者对PD-1阻断疗法响应更佳。该研究阐明FAM135B-IFI16-STING轴可通过激活细胞毒性T细胞免疫应答，为TNBC的免疫治疗提供新的预测标志物与联合治疗靶点。