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ECOS感受态细胞是由台湾Yeastern Biotech(益生生技)开发的,目前由Sigma-Aldrich公司代理销售。ECOS是E.Coli. One-Step transformation的缩写,换言之,它是一步法的转化。与传统的转化过程相比,最大的不同是省却了复苏的步骤。一般的转化都需要复苏,整个过程约需1-2小时。而ECOS跳过了复苏这一步,在1分钟转化过后直接涂板,因此过程大大简化。
细菌转化的操作已经成为最常规的实验了,不肖多说,生物人都知道。但是,转化过程也是在不断地进化。从前,大家都是自己制备感受态细胞,但转化效率不太高,而且每次的差异较大。渐渐地,一部分先富起来的实验室开始购买商业化的感受态细胞。商业化的感受态细胞也有很多种,今天我们要介绍的是能够实现快速转化的ECOS感受态细胞。
ECOS感受态细胞是由台湾Yeastern Biotech(益生生技)开发的,目前由Sigma-Aldrich公司代理销售。ECOS是E.Coli. One-Step transformation的缩写,换言之,它是一步法的转化。与传统的转化过程相比,最大的不同是省却了复苏的步骤。一般的转化都需要复苏,整个过程约需1-2小时。而ECOS跳过了复苏这一步,在1分钟转化过后直接涂板,因此过程大大简化。
如果你希望转化效率更高,可以选择45秒的热击,不用冰浴,马上涂布在预冷的平板上;如果你赶时间的话,连热击都可省略。
与传统的市售感受态细胞相比,ECOS感受态细胞的优势在于:
ECOS系列感受态细胞有5种,分别适合于不同的应用,比如大质粒、单链DNA的克隆,蓝白斑筛选和蛋白表达。DH5a、BL21这些都是耳熟能详的,而ECOS C41和C43是后来推出的,因为这两种菌株在毒性蛋白的表达方面比BL 21更佳。具体的选择指南详见下表。
克隆应用 |
ECOS 101 (DH |
ECOS 9-5 (JM109) |
ECOS Blue (XL1-Blue) |
ECOS 21 (BL 21) |
ECOS C41/C43 |
大质粒 > 6 kb |
最佳选择 |
* |
* |
* |
* |
亚克隆 |
最佳选择 |
合适 |
合适 |
* |
* |
cDNA 文库 |
合适 |
合适 |
合适 |
* |
* |
单链DNA |
* |
最佳选择 |
* |
* |
* |
快速生长 |
* |
合适 |
* |
合适 |
合适 |
突变 |
合适 |
* |
* |
不行 |
不行 |
蛋白表达 |
* |
* |
* |
最佳选择 |
最佳选择 |
毒性蛋白的表达 |
不行 |
不行 |
不行 |
不行 |
最佳选择 |
蓝白斑筛选 |
合适 |
最佳选择 |
最佳选择 |
最佳选择 |
不行 |
*表示可应用于此范围,但表现未必最佳
(生物通 余亮)
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