在癌症治疗的战场上，抗体偶联药物（ADCs）就像是精准制导的导弹，它将抗体的特异性与细胞毒性药物的强大杀伤力相结合，能够精准地攻击癌细胞，同时尽可能减少对健康组织的伤害，成为了癌症治疗领域的明星。然而，传统的 ADCs 在实际应用中却遇到了难题。有些 ADCs 所靶向的受体不仅在肿瘤细胞上表达，在一些正常组织中也存在，这就导致了 “脱靶毒性” 的出现，就像导弹误炸了无辜的区域，使得患者不得不减少用药剂量甚至中断治疗。
上皮细胞黏附分子（EpCAM）是一种在多种上皮肿瘤中高表达的肿瘤抗原，本应是 ADCs 的理想靶点。但它在正常组织，如胃肠道中也有一定表达，这使得以 EpCAM 为靶点的 ADCs 在临床试验中面临重重挑战，容易对正常组织产生毒性。而紧密连接蛋白 3（CLDN3）在多种人类癌症中高度表达，在正常组织中却很少出现，这让它成为了开发高效治疗性 ADCs 的理想目标。
为了攻克这些难题，来自广州医科大学附属肿瘤医院、中国科学院力学研究所等多家机构的研究人员，开展了一项极具意义的研究。他们致力于开发一种同时靶向 EpCAM 和 CLDN3 的双特异性抗体偶联药物（BsADC），希望能更精准地将强效毒素输送到肿瘤细胞，减少对正常组织的毒性。研究成果发表在《Experimental Hematology & Oncology》杂志上。
研究人员在研究过程中，运用了多种关键技术方法。首先是细胞培养技术，培养多种人类癌细胞系用于后续实验。在抗体研发方面，通过免疫小鼠获得 EpCAM 和 CLDN3 的单克隆抗体，再利用 Knob-into-hole 和 CrossMab 技术制备双特异性抗体（BsAbs） 。此外，运用表面等离子共振（SPR）技术评估抗体与抗原的亲和力，通过体内外实验，如细胞毒性实验、荷瘤小鼠模型实验等，来评估 BsADC 的疗效和安全性。
研究结果主要从以下几个方面展开：
- EpCAM 和 CLDN3 的表达情况：通过对数据库的分析和对多种肿瘤细胞系的检测发现，EpCAM 和 CLDN3 在多种肿瘤中共同高表达，但在部分细胞系中表达情况有所差异。这一结果表明，CLDN3 有望与 EpCAM 一起作为靶点，开发用于治疗多种实体瘤的 BsADC。
- 亲本抗体的选择和 BsADCs 的制备：研究人员制备并筛选出对 EpCAM 和 CLDN3 具有高结合和内吞活性的亲本单克隆抗体（mAbs），将其改造为单价结构后筛选出活性合适的克隆，进而构建出 15 种 EpCAM X CLDN3 BsAbs，最终选择了 3 种具有良好结合和内吞活性的 BsAbs 来构建 BsADCs。
- EpCAM X CLDN3 BsADCs 的抗肿瘤活性：在体外实验中，BsADCs 对高表达 EpCAM 和 CLDN3 的癌细胞系表现出剂量依赖性的抗增殖作用，而对低表达的细胞系作用较弱；在体内实验中，BsADCs 在小鼠异种移植模型中显著抑制肿瘤生长，其中 BsADC 3 效果最佳。
- BsADC 3 对正常组织的毒性：由于 EpCAM 在一些正常组织中表达，而 CLDN3 在这些组织中低表达，研究人员推测 BsADC 3 对高表达 EpCAM 但低表达 CLDN3 的细胞具有较低的结合和细胞毒性。实验结果证实了这一推测，在小鼠模型中，BsADC 3 在高表达 EpCAM 和 CLDN3 的肿瘤模型中表现出强大的抗肿瘤活性，在高表达 EpCAM 但低表达 CLDN3 的模型中，其抗肿瘤活性与 EpCAM 单价 ADC 相近，低于亲本二价 ADC，这表明 BsADC 3 有助于扩大临床治疗窗口。
- BsADC 3 的药代动力学和安全性：在小鼠模型中，BsADC 3 表现出良好的药代动力学特性，其总抗体和结合抗体的半衰期分别为 9.2 天和 9.7 天，且在血浆中稳定。同时，BsADC 3 安全性良好，在重复给药研究中，未观察到明显毒性，对肝脏等正常组织无明显不良影响。
研究结论表明，靶向 EpCAM 和 CLDN3 的 BsADCs 在治疗多种实体瘤方面展现出巨大的潜力。它不仅能有效抑制肿瘤细胞生长，还能降低对正常组织的毒性，为癌症患者带来了新的希望。然而，目前 BsADCs 仍处于探索阶段，未来需要进一步优化和研究，以充分发挥其在癌症治疗中的作用。相信在科研人员的不断努力下，这种新型药物将为癌症治疗领域带来更多突破，为患者带来更好的治疗效果和生活质量。
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