脑转移瘤中三级淋巴结构（TLS）的鉴定与特征分析：揭示免疫微环境异质性及临床预后意义

本研究针对脑转移瘤（BrM）免疫微环境复杂性和治疗困境，通过转录组测序与空间免疫细胞分析，首次系统揭示了不同原发肿瘤来源BrM中三级淋巴结构（TLS）的分布特征及其与预后的关联。研究发现肺癌和黑色素瘤BrM具有更高TLS丰度，且TLS阳性患者生存期显著延长，为BrM免疫治疗策略开发提供了关键分子标志物和潜在干预靶点。

脑转移瘤（BrM）是癌症患者最常见的颅内肿瘤，占中枢神经系统肿瘤的90%以上，其五年生存率不足3%。尽管免疫检查点抑制剂（ICI）在部分实体瘤中取得突破，但血脑屏障和免疫豁免特性使BrM成为"治疗黑洞"。更棘手的是，不同原发肿瘤（如肺癌、乳腺癌、黑色素瘤）来源的BrM表现出显著异质性，但驱动这种差异的免疫微环境特征尚不明确。德国癌症研究中心等机构的研究团队在《Acta Neuropathologica Communications》发表的研究，首次通过多组学方法揭示了三级淋巴结构（Tertiary Lymphoid Structures, TLS）在BrM中的关键作用。

研究团队采用RNA测序（RNA-seq）分析95例BrM患者的转录组，结合多重免疫荧光（mIF）空间成像技术，构建了首个BrM特异性TLS基因特征谱。队列涵盖肺癌（35例）、乳腺癌（29例）、黑色素瘤（24例）等主要BrM类型，所有样本均经神经病理学确诊并确保肿瘤细胞含量≥80%。关键技术包括：MCP-counter算法进行免疫细胞反卷积分析、32基因TLS特征评分系统、7色mIF面板（CD3/CD20/Lamp3等）定量免疫细胞空间分布，以及生存分析的Cox比例风险模型。

免疫细胞浸润的异质性特征
通过MCP-counter将BrM分为6个免疫亚型（IC1-IC6），肺癌和黑色素瘤BrM的免疫细胞浸润评分（ICI）显著高于乳腺癌（p<0.01）。IC2-IC6亚型富含T细胞、B细胞和髓系树突状细胞（mDC）——这些正是TLS的核心组分。

TLS转录特征的发现
整合12-趋化因子特征、B细胞标志物（CD19/MS4A1等）和生发中心标记（LAMP3）构建的32基因特征，将BrM分为TLS1（低表达）-TLS3（高表达）三组。值得注意的是，68%乳腺癌BrM归入TLS1，而12/35肺癌BrM（均为NSCLC）和7/24黑色素瘤BrM呈现强TLS3特征。TLS3组同时显示更高的细胞溶解活性评分（p=0.002），提示TLS可能增强细胞毒性T细胞功能。

空间免疫图谱验证
mIF在60例样本中确认了TLS的实体存在：CD20⁺B细胞与CD3⁺T细胞形成血管周围聚集（>500个细胞），含Lamp3⁺树突细胞时定义为"成熟TLS"。独立黑色素瘤队列（n=53）中42%存在TLS，与转录组数据高度吻合（κ=0.55）。

TLS的分子机制
TLS阳性BrM显著上调B细胞受体信号（CD79A/MS4A1）、淋巴毒素β（LTB）通路和免疫检查点分子（PD-1/CTLA-4）。基因富集分析显示免疫球蛋白合成（p=1.2×10^-15）和T细胞活化（p=3.4×10^-9）通路激活，而LTB-R信号可能通过诱导高内皮微静脉（HEV）参与TLS维持。

临床预后价值
在肺癌BrM中，TLS高评分患者中位生存期显著延长（p=0.0095），且该结论在外部验证队列（GSE159407）中复现（p=0.028）。值得注意的是，未接受过治疗的BrM更易检出TLS（OR=4.1, p=0.008），提示化疗可能破坏TLS结构。

这项研究首次系统描绘了BrM中TLS的分子-细胞-临床全景图谱，突破性地揭示：① TLS是影响BrM免疫微环境异质性的核心要素；② LTB等通路可能成为TLS调控靶点；③ TLS评分可作为肺癌BrM预后标志物。鉴于TLS在ICI响应中的已知作用，该发现为BrM免疫治疗分层提供了新依据。未来需在前瞻性队列中验证TLS指导的联合治疗策略，并探索血脑屏障穿透性LTB激动剂的开发价值。