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这篇开创性研究揭示了TGF-β信号在肝内胆管癌（iCCA）中的双重作用机制：通过SMAD2/3/4通路抑制肿瘤细胞增殖，同时通过NOX4/NOX1激活癌症相关成纤维细胞（CAF）。研究创新性地提出使用双靶点抑制剂setanaxib选择性阻断TGF-β促癌作用，在保留其抑癌功能的同时，显著抑制肿瘤生长，为克服当前TGF-β受体抑制剂临床失败提供了转化医学新思路。
TGF-β信号通路在胆管癌中的双刃剑效应
Abstract
转化生长因子β（TGF-β）信号通路因其对上皮细胞的促癌作用和对肿瘤微环境（TME）的免疫抑制特性，已成为极具吸引力的治疗靶点。在高度恶性且预后极差的肝内胆管癌（iCCA）中，最新临床试验显示TGF-β抑制剂疗效不佳。本研究系统揭示了TGF-β在iCCA中通过经典SMAD2/3/4信号通路发挥显著抑癌作用的分子机制，而抑制TGF-β受体反而促进肿瘤细胞生长。
Results
TGF-β信号在人类和鼠类CCA样本中的激活状态
通过对IDIBELL队列、TCGA和TIGER-LC数据库的分析，发现iCCA中TGFB1-2配体和TGFBR1受体表达显著升高。免疫组化显示SMAD2磷酸化水平增加，证实TGF-β信号通路激活。值得注意的是，高表达TGFBR1和TGFBR2与患者不良预后显著相关，而TGF-β通路核心成分的突变频率仅为6.6%。
TGF-β抑制促进CCA肿瘤细胞体外生长
在7种人iCCA细胞系中，5种对TGF-β1处理表现出敏感性，细胞活力下降超过50%，并伴随上皮-间质转化（EMT）样形态变化。机制研究发现，这种抑制作用依赖于完整的SMAD2/SMAD3磷酸化信号。使用TGF-β受体抑制剂galunisertib处理，反而促进HuCCT1和RBE细胞系形成更多克隆和更大球体。RNA-seq分析显示，TGF-β1上调细胞外基质（ECM）相关通路，同时下调DNA合成和细胞周期进程通路。
NOX4在iCCA中的特异性表达模式
单细胞RNA测序数据揭示NOX4特异性表达于CAF，尤其集中在肌成纤维细胞型CAF（myCAF）和抗原呈递型CAF（apCAF）。免疫组化证实NOX4与α-SMA和胶原沉积共定位。在激光显微切割的iCCA基质样本中，NOX4表达与ACTA2和COL1A1等CAF标志物显著相关。
NOX4/NOX1双重抑制的必要性
在NOX4敲除小鼠模型中，肿瘤生长未见差异。深入研究发现，NOX4缺失后，NOX1通过上调p22phox产生代偿效应。只有同时敲低NOX4和NOX1，才能完全阻断TGF-β诱导的α-SMA和胶原1表达。临床数据分析显示，NOX4和NOX1双低表达患者生存期显著延长。
双靶点抑制剂setanaxib的治疗潜力
在三种肝星状细胞（HSC）系中，setanaxib有效抑制TGF-β诱导的CAF活化标志物表达。转录组分析显示，setanaxib调控的基因数量（1390个）远超galunisertib（325个），显著抑制肌成纤维细胞活化相关通路。在混合球体实验中，setanaxib特异性抑制含CAF的球体生长，而galunisertib则促进生长。
体内模型的治疗验证
在PDX模型中，setanaxib治疗使肿瘤体积显著缩小，CAF标志物α-SMA和胶原沉积减少，而galunisertib组肿瘤增大。AKT-YAP模型证实，setanaxib降低肿瘤结节数量，改善病理分级，增加CD4+ T细胞浸润，同时降低PD-L1表达。患者分层分析显示，setanaxib特征富集组生存期延长，与CD4+ T细胞活化正相关。
Discussion
本研究阐明了iCCA中TGF-β信号通路的独特作用模式：通过SMAD依赖性机制抑制肿瘤细胞，同时通过NOX4/NOX1依赖性途径激活CAF。这种双重特性解释了直接靶向TGF-β受体治疗的局限性，并确立了setanaxib这种选择性靶向下游效应分子的临床转化价值。该双靶点抑制剂不仅能有效抑制CAF功能，还可改善肿瘤免疫微环境，为iCCA治疗提供了具有精准医学特色的新策略。
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