头颈鳞状细胞癌（HNSCC）是一种具有高度侵袭性的恶性肿瘤，其治疗失败率居高不下，主要归因于化疗耐药和肿瘤转移。尽管手术、放疗和化疗手段不断进步，但患者的5年生存率仍不理想，亟需创新性治疗策略。上皮-间质转化（EMT）被认为是导致治疗抵抗和预后不良的关键因素。在这一过程中，上皮细胞获得间质特性，增强其迁移、侵袭和耐药能力。近年来，耐药持久细胞（Drug-Tolerant Persister, DTP）的发现为理解肿瘤复发提供了新视角。这类细胞能够在化疗压力下存活并长期休眠，最终导致疾病复发。然而，DTP细胞维持耐药性的分子机制及其与肿瘤微环境（Tumor Microenvironment, TME）的相互作用尚不明确。
本研究聚焦于小GTP酶家族成员RHOJ在HNSCC DTP细胞中的功能。前期研究已提示RHOJ与免疫治疗抵抗相关，但其在化疗耐药和EMT调控中的具体作用仍有待阐明。研究人员通过体外细胞模型、动物实验及临床样本分析，系统揭示了RHOJ通过IPO9/EpCAM信号轴促进细胞骨架重组、氧化应激适应及免疫微环境重塑的分子机制。此外，研究还发现靶向RHOJ下游的F-肌动蛋白聚合可有效逆转DTP细胞的耐药表型，为联合化疗提供了新思路。该论文发表于《Translational Oncology》，为克服HNSCC临床耐药提供了重要的理论依据和实验证据。
在方法学上，作者整合了多种关键技术：首先，利用60例临床 cisplatin 耐药HNSCC组织构建组织芯片（TMA），并通过免疫组化（IHC）量化RHOJ表达；其次，通过体外诱导SCC-9和HSC-3细胞系建立DTP模型，并采用RNA测序分析差异表达基因；第三，采用shRNA敲低和过表达技术验证RHOJ在细胞迁移、巨噬细胞极化中的功能；第四，建立原位舌癌小鼠模型，评估F-肌动蛋白抑制剂Latrunculin B（HY-101,848）与顺铂联用的疗效；最后，结合生物信息学分析（TCGA、GEO数据库）及单细胞转录组数据，揭示RHOJ相关信号网络在肿瘤血管生成和免疫细胞浸润中的作用。
Relationship between high RHOJ expression in cisplatin-resistant HNSCC and M2 polarization, cytoskeletal remodeling, and stress-adaptation pathways
临床样本分析显示，RHOJ在 cisplatin 耐药HNSCC组织中表达显著升高，且与磷酸化AKT（pAKT）水平正相关。免疫荧光共定位提示RHOJ富集于CD31+血管内皮细胞和CD206+M2型巨噬细胞，表明其参与血管重塑和免疫抑制微环境形成。转录组相关性分析进一步发现RHOJ与RAC1（细胞骨架调控）、STAT6（M2极化）及SOD2（氧化应激适应）等基因表达密切关联。
Molecular and cellular adaptations in DTP SCC9-p cells
与亲本SCC-9细胞相比，DTP细胞（SCC9-P）呈现伸长形态和细胞骨架重组。RNA测序显示RHOJ、IPO9、IL10等基因显著上调，而凋亡相关通路基因下调。肿瘤球形成实验表明SCC9-P细胞具有更强的干细胞特性，且其迁移能力和化疗耐受性显著增强。
RHOJ as a key regulator of tumor microenvironment remodeling in HNSCC
RHOJ在肿瘤组织中的表达高于癌旁正常上皮，且与TXNRD1、AKT等分子构成核心调控轴。跨数据库分析（GSE9844、GSE6791）验证RHOJ及相关基因在HNSCC中普遍上调，且其表达水平与肿瘤分期无显著相关性，提示RHOJ是持续参与TME重塑的基础因子。
Single-Cell and molecular analysis of RHOJ in HNSCC TME
单细胞转录组分析显示RHOJ高表达于内皮细胞簇和巨噬细胞/成纤维细胞群。蛋白互作网络表明RHOJ与PAK1、LIMK1、EGFR等信号分子直接相互作用，富集分析提示其参与干细胞增殖、血管生成及代谢重编程等过程。
Effect of RHOJ inhibition on tumor cell migration and chemosensitivity in SCC9-P cells
shRNA敲低RHOJ可抑制SCC9-P细胞迁移，并下调IPO9、MSN（Moesin）、EpCAM等基因表达。F-肌动蛋白抑制剂Latrunculin B处理可破坏肌动蛋白聚合，增强顺铂对DTP细胞的杀伤效果。共培养实验进一步证明RHOJ沉默抑制M2巨噬细胞活化，而过表达则促进其增殖。
F-actin polymerization inhibition attenuates tumor growth and drug resistance in an orthotopic HNSCC DTP mouse model
在原位移植瘤模型中，Latrunculin B与顺铂联用可显著抑制肿瘤生长、延长小鼠生存期，并降低Ki-67、RHOJ、IPO9表达，同时升高凋亡标志物cleaved caspase-3水平。
本研究系统阐释了RHOJ通过调控EMT、细胞骨架动力学和免疫微环境，驱动HNSCC DTP细胞化疗耐药的多层次机制。靶向RHOJ-细胞骨架轴可有效逆转耐药表型，为临床联合治疗提供了新策略。未来需进一步开发选择性RHOJ抑制剂，并探索其与免疫检查点阻断剂的协同作用。
