在碳限制的环境中,氨氧化细菌增加了异养细菌生物膜的形成风险

时间:2025年10月25日
来源:Journal of Cleaner Production

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本研究通过构建含氨氧化菌(AOB)与异养菌的模拟系统,揭示碳限制条件下AOB促进异养菌生物膜形成的机制。转录组分析表明,AOB代谢产物增强异养菌鞭毛合成、能量代谢及胞外聚合物分泌,从而促进生物膜形成与稳定。结论指出控制AOB可降低饮用水系统生物膜风险。

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郑世堪|李建国|赵文雅|严万里|冯明宝|余欣|赵阳颖|叶成松
河南工业大学环境工程学院,中国河南省郑州市450001

摘要

饮用水分配系统(DWDS)中的生物膜形成对水质安全构成了重大威胁,而碳限制的管道环境却 paradoxically 促进了生物膜的滋生。氨氧化细菌(AOB)作为化能自养菌,可以通过氧化氨并为系统提供有机碳来克服这一限制。然而,AOB在生物膜形成中的确切作用仍不甚明了。本研究使用从环境中分离出的典型异养菌 Sphingomonas sp. 和 Nitrosomonas eutropha(AOB)构建了一个模拟系统,以探究在碳限制条件下AOB对异养生物膜形成的贡献及其机制。结果表明,N. eutropha 显著促进了异养细菌的生物膜形成。这一过程主要分为两个阶段:首先,N. eutropha 通过其强表面疏水性和高聚集效率加速了生物膜的初始附着阶段;此外,Sphingomonas sp. 的酯酶活性以及细胞外聚合物的分泌也得到了增强,进一步稳定了生物膜。为了进一步阐明机制,对暴露于AOB代谢产物的 Sphingomonas sp. 进行了转录组分析。结果表明,AOB通过促进鞭毛合成来帮助细菌初始附着,从而促进了异养生物膜的形成。同时,AOB还上调了异养细菌的能量代谢(包括糖酵解/糖异生和TCA循环)和分泌系统,进一步推动了生物膜的发展。这些发现为低营养条件下的生物膜形成机制提供了新的见解,强调了控制AOB对于降低DWDS中生物膜相关风险的重要性。

引言

清洁的饮用水对人类生存至关重要,尤其是其微生物安全性(Bai等人,2015;Hayes和Gagnon,2024)。饮用水分配系统(DWDS)中的生物膜存在重大风险,因为它们藏有机会性病原微生物(如 军团菌铜绿假单胞菌鸟分枝杆菌),这些微生物可能随着脱落的生物膜释放到水中,导致微生物危害(Shen等人,2017;Waak等人,2019)。此外,生物膜还会加速消毒剂的消耗并促进管道腐蚀,进一步降低微生物抑制作用(Aggarwal等人,2018;Zheng等人,2024)。因此,控制DWDS中的生物膜形成对于确保饮用水的生物安全性至关重要。
氯胺作为一种氧化剂,是控制DWDS中生物膜形成的有效策略(Zheng等人,2023)。然而,氯胺的形成和分解不可避免地会导致氨的释放(Zheng等人,2023)。释放的氨作为生长底物,促进了氨氧化细菌(AOB)的硝化作用和增殖(Regan等人,2003)。在DWDS的水体、生物膜和沉积物样本中广泛检测到了AOB的存在(Cunliffe,1991;Zheng等人,2024)。越来越多的研究表明,AOB的存在伴随着异养细菌的生长(Cunliffe,1991;Miao和Bai,2021;Zheng等人,2023)。这一观察尤为重要,因为DWDS通常处于贫营养状态,这对异养细菌的再生通常不利(Cowle等人,2019)。尽管如此,生物膜在这些系统中仍然普遍存在(Liu等人,2016;Zheng等人,2023)。随着研究的深入,发现AOB产生的代谢产物和细胞残余物可以作为异养细菌的可利用底物(Okabe等人,2005;Yang等人,2008)。此外,作为化能自养菌,AOB能够将二氧化碳固定为细胞生物质,从而克服碳限制(Zhang等人,2009)。在残留消毒剂较低或不存在的管道中,碳限制是维持生物稳定性的主要机制。AOB的存在可能挑战了“有机碳限制异养细菌生长”的观点(Chandy和Angles,2001;Hammes和Egli,2005)。
虽然AOB对细菌生长的贡献已被认可,但其在生物膜形成中的作用仍不完全清楚。生物膜的形成不仅依赖于细菌的增殖(Liu等人,2016;Zheng等人,2023),还涉及复杂的细胞间相互作用,这些相互作用调节着附着、聚集、分散、信号传递和代谢交换等关键过程(Afonso等人,2023;Dai等人,2017;Wang等人,2022)。例如,Pseudomonas fluorescensDelftia acidovorans 共培养时表现出增强的生物膜形成,这种现象归因于蛋白质介导的共聚集(Afonso等人,2023)。同样,Pseudomonas fluorescensListeria monocytogenes 的共培养也促进了生物膜的发展,这与细胞外多糖(PS)和蛋白质(PN)的产生增加有关(Zhou等人,2024)。基于实际水环境中分离出的细菌构建混合模拟系统对于研究AOB在DWDS中影响生物膜形成的潜在机制至关重要。
本研究旨在揭示AOB在碳限制环境下促进生物膜形成和维持的潜在机制。在模拟的饮用水碳限制条件下,使用从环境中分离出的 Nitrosomonas eutropha(AOB)和 Sphingomonas sp. 建立了一个混合培养系统。通过转录组分析,阐明了AOB代谢产物如何在碳限制条件下促进异养生物膜的形成。这项研究为基于生态调控的管理策略提供了重要的理论支持。

部分摘要

细菌菌株和培养条件

本研究中使用的 N. eutrophaSphingomonas sp. 菌株是从实际水系统中分离得到的。N. eutropha 代表AOB(Zheng等人,2024),而 Sphingomonas sp. 被选为典型的异养菌。在含氯胺的DWDS中,Nitrosomonas 被认为是发育中的饮用水生物膜中最普遍的AOB属(Lipponen等人,2004;Rosenqvist等人,2023)。值得注意的是,在全尺度实验中检测到与 N. eutropha 密切相关的16S rRNA序列

AOB在碳限制条件下促进异养细菌的生物膜形成

形态学特征显示,不同实验组之间的生物膜发育模式存在差异(图1)。在单菌培养中,尤其是在 N. eutropha 生物膜中,观察到PVC表面的细胞附着有限,细胞分布稀疏(绿色荧光),且细胞大小差异显著(图1a)。相比之下,双菌混合培养的生物膜在15天培养后形成了密集的多层结构(图1a)。扫描电子显微镜(SEM)分析进一步显示了细胞凝聚力的增强

结论

作为化能自养菌,AOB加速了生物膜形成的所有阶段——从初始附着到成熟。在含氯胺的DWDS中,建议持续监测AOB活性作为生物膜风险评估的关键指标。考虑到AOB分泌的代谢产物的影响,控制进水氨氮浓度或实施紫外线消毒可以有效抑制AOB的代谢活动并抑制生物膜的形成。

作者贡献声明

郑世堪:撰写——初稿。李建国:方法学研究。赵文雅:实验研究。严万里:软件开发。冯明宝:资金获取。余欣:实验监督。赵阳颖:实验监督、软件开发及资金获取。叶成松:撰写——审稿与编辑。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文工作的财务利益或个人关系。

致谢

本研究得到了国家重点研发计划(2023YFE0112100)、国家自然科学基金(编号52300066)以及水利部重大科技项目“南方山区输电变电工程水土流失防治与碳封存潜力评估”(SKS-2022085)的支持。

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