Sydney E. Christensen | Maria Ali | Jorden N. Holland | Bruce B. Riley
章节片段
引言
脊椎动物的内耳是一个复杂的感官系统,包含多个专门负责前庭或听觉功能的感觉上皮。在斑马鱼中,耳囊中首先形成的感觉上皮是前庭斑点和后囊斑点(Haddon和Lewis,1996)。前庭斑点对前庭功能至关重要,并在受精后3天(dpf)开始发挥作用(Riley和Moorman,2000;Kwak等人,2006)。
材料与方法
鱼类品系和发育条件。野生型斑马鱼胚胎来自AB品系,在28.5°C的标准条件下培养,并在24小时受精后(24hpf)使用PTU(1-phenyl 2-thiourea,Sigma P-7629)处理,以防止黑色素形成(Kimmel等人,1995)。本文使用的先前发表的突变体品系包括fgf3t21142(Herzog等人,2004)、gscx59(Kantarci等人,2016)和pou3f3be1502(Barske等人,2020)。我们还生成了一个新的突变体品系pou3f3bx77。
pou3f3b敲除突变体影响后囊发育
为了研究pou3f3b的功能,我们使用CRISPR/Cas9技术生成了一个敲除突变体(等位基因x77),该突变体在翻译起始位点下游8个碱基对处发生缺失,导致移码和提前终止(图1A)。纯合的pou3f3bx77/x77突变体具有生存能力和繁殖能力,与之前描述的pou3f3be1502突变体(Barske等人,2020)相似。比较野生型和pou3f3bx77/x77突变体在24-36小时受精后的表达情况,发现后囊的表达没有变化(图1B-E)。
讨论
我们发现pou3f3b调控斑马鱼内耳发育的两个基本方面:pou3f3b促进后囊/听觉斑点的正常发育(图7A),并在神经发生早期促进新生神经母细胞的及时成熟(图7B)。这些内容将在下文中详细讨论。
后囊发育。后囊区域中pou3f3b的激活需要从板层释放的Shh信号以及微弱的Fgf信号之间的相互作用。
CRediT作者贡献声明
Bruce Riley:撰写初稿、监督、项目管理、方法设计、资金申请、数据分析、概念构思。Jorden N. Holland:撰写、审稿与编辑、方法设计、实验研究、数据分析。Maria Ali:撰写、审稿与编辑、方法设计、实验研究、数据分析。Sydney E. Christensen:撰写、审稿与编辑、方法设计、实验研究、数据分析
未引用的参考文献
Mapps等人,2922;Zeddies和Fay,2005。