比较基因组学揭示了瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)的种群结构及其生态适应性

时间:2025年12月28日
来源:Food Research International

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本研究通过比较基因组学分析284株Lactobacillus helveticus,揭示了其核心基因组(490基因)和开放泛基因组(15105基因)结构,分为六类进化谱系,生态位和地理分布显著影响遗传进化,功能代谢差异显著但内部肽酶高度保守,为工业菌株优化提供理论依据。

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胡海敏|吴娇|孙家琪|王思萌|刘金辉|段彤
教育部乳品生物技术与工程重点实验室,内蒙古农业大学,中国呼和浩特

摘要

瑞士乳杆菌L. helveticus)是发酵乳制品生产中的重要起始菌株,因其显著的蛋白水解活性而受到重视。然而,其功能多样性和生态适应性的遗传基础仍需进一步研究。本研究对来自不同地理区域和生态位的284株L. helveticus进行了比较基因组分析。研究确定了包含490个基因的核心基因组以及包含15,105个基因的泛基因组,揭示了该物种的开放泛基因组结构。系统发育分析将菌株分为六个不同的进化支系,表明其遗传进化可能是由与生态位相关的选择压力驱动的。不同系统发育和生态支系之间存在统计学上显著的功能代谢差异(P < 0.05),而细胞内肽酶则高度保守。对血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的评估显示,不同系统发育支系之间没有显著差异。这些发现表明L. helveticus进化出了适应多种生态环境的基因组机制。本研究突出了该物种的功能多样性,并为未来工业菌株的选择和开发提供了重要的理论基础。

引言

瑞士乳杆菌L. helveticus)是一种革兰氏阳性乳酸菌(LAB),广泛存在于发酵乳制品中,包括酸奶和奶酪(Skrzypczak等人,2015年)。作为乳制品工业中的主要起始菌株,它常用于瑞士奶酪、意大利陈年奶酪和发酵乳饮料的生产(Sun, Harris等人,2015年)。通过其强大的蛋白水解活性,L. helveticus促进奶酪成熟并提升风味。这一水解过程释放出生物活性肽,具有免疫调节和抗高血压等生理作用(Begunova等人,2020年;Zago等人,2021年)。Baptista等人(2020年)证明,在奶酪制造中使用L. helveticus作为辅助菌株可以改善风味和生物活性,同时降低盐含量。此外,L. helveticus对焦虑症、抑郁症和压力相关认知功能障碍患者具有有益效果(Verma等人,2023年)。Kazemi等人(2019年)在鼠模型中报告,L. helveticus R0052和鼠李糖乳杆菌 R0175联合使用可改善焦虑和抑郁行为。
作为一种典型的氨基酸缺陷型菌株,L. helveticus在自由氨基酸供应较低的环境中(如牛奶)生长时,需要比许多其他LAB更高效的蛋白水解系统(Callanan等人,2007年)。该系统包括细胞包膜相关蛋白酶(CEP)、细胞内肽酶(PEP)和寡肽转运系统(Opp和Dpp),这些对于从牛奶蛋白质中获取氨基酸至关重要。L. helveticus的蛋白水解作用产生特定的生物活性肽;例如,发酵过程中产生的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽有助于血压调节(Zhou等人,2019年)。因此,L. helveticus的地位已从技术辅助剂发展为开发功能性食品和营养品的理想候选菌株。例如,用L. helveticus 881,315发酵的酸奶富含ACE抑制肽(Shi等人,2017年)。
瑞士乳杆菌的进化轨迹深受其生态起源的影响(Skrzypczak等人,2020年)。尽管大多数记录在案的L. helveticus分离株来自乳制品,但也有少量分离株来自成人和婴儿肠道环境及其他来源(Prajapati等人,2011年)。据推测,当LAB从营养变化大的动态栖息地转变为营养丰富的稳定乳制品环境时,它们的基因组会经历重组进化(Makarova等人,2006年)。这一过程以基因组衰减和假基因化为特征,被认为是对不同营养环境的适应策略,可能解释了菌株间的显著表型和基因型多样性(Makarova等人,2006年)。Bolotin等人(2004年)证明,适应牛奶环境会导致嗜热链球菌的基因组显著衰减,假基因化率可达10%。这种重组趋势涉及与碳水化合物利用和非必需毒力因子相关的基因丢失,从而增强基因组稳定性和适应性。L. helveticus的基因组还包含大量假基因和移动遗传元件,反映了适应过程中的重组进化和谱系特异性基因丢失(Callanan等人,2008年)。Callanan等人(2008年)还观察到L. helveticus缺乏许多与肠道定植相关的基因,这可能反映了其对乳制品生态位的特化适应。对L. helveticus CNRZ32的研究进一步表明,其基因组也经历了重组进化,这是乳制品相关LAB的常见适应趋势(Broadbent等人,2013年)。由于许多技术相关特性是菌株特异性的,即使来自同一生态位的菌株也可能表现出显著差异。因此,对来自不同生态位的菌株进行比较基因组研究对于阐明LAB的多样性和进化历史以及了解其生理和代谢机制至关重要(Chelladhurai等人,2023年;Schuster等人,2020年)。
高通量测序技术的进步以及测序成本的降低,使得比较基因组学成为研究微生物多样性的不可或缺的工具。全基因组测序和比较分析能够从遗传层面解析功能差异,并有助于筛选具有理想特性的菌株(Aziz等人,2023年)。Aziz, Naveed, Shabbir, Sarwar, Naseeb等人(2024年)通过基因组学和生物信息学分析阐明了Lactiplantibacillus plantarum HMX2的遗传多样性,该菌株拥有丰富的功能基因库。Liu等人(2022年)证明乳酸乳球菌亚种lactis可以划分为四个不同的组,这可能是由三次分化事件导致的,这些事件导致了遗传和表型分化。功能基因组分析进一步表明,这些分化事件驱动了与碳水化合物利用和乳酸生产相关的基因的强烈谱系特异性选择。在另一项研究中,Slattery等人(2010年)报告L. helveticus DPC4571不仅具有高蛋白水解活性,还携带多种关键蛋白水解基因和酶产物,使其适合作为起始菌株。此外,L. helveticus CNRZ32的完整基因组为这种广泛用作辅助菌株以提升奶酪风味和产生生物活性肽的菌株提供了遗传蓝图(Broadbent等人,2013年)。
尽管对L. helveticus的工业价值和生理功能进行了大量研究,但其群体遗传结构、功能基因分布模式及其在不同生态位中的表型多样性关联尚未得到系统研究。因此,本研究采用比较基因组学方法来描绘来自不同来源的L. helveticus的遗传背景、系统发育关系和群体结构。本研究还初步考察了发酵速率和ACE抑制活性的表型变异。通过阐明该物种多样性的基因组基础,本研究旨在提供关于生态适应机制的新见解,同时为合理选择和开发功能优化菌株提供遗传基础。

章节摘录

瑞士乳杆菌分离株和培养条件

本研究分析了284株L. helveticus的基因组。这些样本包括83个新获得的分离株,存放在内蒙古微生物资源国家收藏库中,以及从国家生物技术信息数据库获得的201个公开可用的基因组(表S1)。所有L. helveticus分离株均在MRS肉汤(中国广东百威生物技术有限公司)中培养24小时。随后,从每个培养物中取少量样本划线接种到MRS琼脂上

瑞士乳杆菌的基因组特征

对来自不同生态和地理区域的284株L. helveticus分离株的基因组特征进行了全面分析。该集合包括206株来自发酵乳制品的分离株,15株来自人类来源,11株来自植物产品,17株来自未发酵乳制品,以及35株来自其他或未知来源。从地理上看,这些菌株主要来自亚洲(172株)和欧洲(78株),北美(8株)、非洲(6株)和其他地区也有少量分布

讨论

随着益生菌产业的扩张,在基因组层面分析该物种的遗传特征和代谢功能对于针对性筛选和开发优质菌株至关重要(Aziz等人,2025年)。Aziz, Naveed, Shabbir, Khan, Sarwar等人(2024年)通过检查不同菌株间的基因顺序保守性和共线性,阐明了Lactiplantibacillus plantarum strains的进化谱系

结论

本研究采用全面的基因组方法阐明了瑞士乳杆菌的群体进化模式和功能适应机制。分析显示,284株L. helveticus分离株具有开放泛基因组,其系统发育结构受到生态位和地理起源的显著影响。功能基因组分析进一步表明,碳水化合物活性酶谱和蛋白水解系统的分布表现出明显差异

CRediT作者贡献声明

胡海敏:写作——审稿与编辑,撰写——初稿,软件使用,研究,数据管理。吴娇:方法学,研究,数据管理。孙家琪:软件使用,方法学,研究。王思萌:方法学,研究,数据管理。刘金辉:方法学,研究,数据管理。段彤:写作——审稿与编辑,监督,项目管理,数据管理。

未引用参考文献

Mirdhayati, Zain, Fatah, Yokoyama and Arihara, 2004
Ruirui, Lijun and Xia, 2024

利益冲突声明

作者声明没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。

致谢

本研究得到了内蒙古自治区研究与开发及成果转化项目2025YFDZ0038)的支持。

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