通过电穿孔优化脓肿分枝杆菌（Mycobacterium abscessus）的转化条件

高效电穿孔转化解分歧枝杆菌（M. abscessus ATCC 19977）需对数生长期、OD600 0.8–4.2，DNA质量关键，0.5μg以下效率不足。

摘要—

分枝杆菌（尤其是M. abscessus）的有效转化受到其细胞壁特殊结构的显著影响。将质粒和噬菌体DNA导入分枝杆菌细胞的最常用且最有效方法是电穿孔。电穿孔的效率受多种因素影响，例如DNA的性质、选择标记物、生长补充物、电脉冲参数以及受体分枝杆菌的物种和菌株。尽管已经详细描述了适用于生长缓慢的病原体M. tuberculosis和生长迅速的腐生菌M. smegmatis的电穿孔条件，但关于M. abscessus的电穿孔方法却存在零散甚至相互矛盾的建议。本研究证实，在对数生长阶段的培养条件下（光密度OD₆₀₀ = 0.8–4.2的范围内），使用复制型载体pMV261可通过电穿孔成功转化M. abscessus ATCC 19977菌株，且冷却处理对转化频率影响较小。一个关键参数是引入DNA的质量：每1 µg DNA所获得的转化体数量与其质量的平方成正比。当引入的质粒DNA质量低于0.5 µg时，电穿孔的效率会显著降低。