1 引言
多重耐药（MDR）革兰氏阴性菌的蔓延对公共卫生构成严重威胁。其中，Aeromonas dhakensis作为一种新兴病原体，因高毒力和耐药性（如对碳青霉烯类耐药）备受关注，其感染死亡率可达25%–37.5%。目前缺乏针对该菌的商用噬菌体产品，而噬菌体及其内溶素（endolysin）因特异性强、不易引发耐药性，成为替代抗生素的潜力候选。本研究首次分离并表征了感染A. dhakensis的巨型噬菌体P19及其内溶素P19_358，旨在为控制MDR病原体提供新资源。
2 材料与方法
噬菌体P19从印度恒河水样中分离，宿主为A. dhakensis CECT 5744T
3 结果
3.1 噬菌体分离与形态
P19噬菌体呈肌尾科典型形态，头部直径82.53±2.3 nm，尾部长度94.83±1.9 nm，形成清晰斑块（直径1.465±0.089 mm）。
3.2 宿主谱
P19对Aeromonas属具高度特异性，可裂解A. dhakensis（CECT 5744T、LMG 24688、A2）、A. caviae（A91）和A. hydrophila（CECT 839T），但对非Aeromonas菌无活性。
3.3 杀菌活性
时间-杀灭实验显示，P19在MOI 0.01–10范围内均能有效裂解宿主菌，且作用可持续7小时。
3.4 效率（EOP）
对A. dhakensis LMG 24688和A2的EOP值分别为0.67和0.79，表明跨菌株感染能力强。
3.5 一步生长曲线
潜伏期为30分钟，裂解量为50±8 PFU/细胞。
3.6 pH与温度稳定性
P19在pH 6–10和≤60°C条件下稳定性高，70°C以上活性骤降。
3.7 基因组分析
P19基因组为线性DNA，长度228,239 bp（GC含量38.8%），含414个ORF、8个tRNA和5个转录终止子。未检测到溶原性、毒力或耐药基因。
3.8 系统发育分类
基于全基因组比对，P19与Aeromonas噬菌体vB_AdhaM_G2相似度达98.9%，被归类为Ceceduovirus属的新物种。
3.9 内溶素P19_358的生物信息学分析
P19_358为T4型溶菌酶（GH24家族），分子量18.8 kDa，无跨膜结构，具有亲水性和稳定性。
3.10 三维结构预测
AlphaFold模型显示其具有典型溶菌酶折叠，活性位点口袋体积为463.584 Å3，适合底物结合。
3.11 分子对接
P19_358与肽聚糖片段NAG-NAM二聚体结合能为-6.4 kcal/mol，主要通过氢键和疏水作用实现。
3.12 抗菌活性
在75 μg/mL浓度下，P19_358对EDTA预处理的革兰氏阴性菌（如A. dhakensis、S. flexneri、P. aeruginosa）裂解活性达71%–97%；对革兰氏阳性菌B. subtilis无需EDTA即可实现99.98%的裂解。
3.13 扫描电镜观察
EDTA与P19_358联合处理导致A. dhakensis细胞膜收缩和变形。
3.14 理化性质
动态光散射（DLS）显示P19_358为单体结构（直径5.89 nm）。差示扫描荧光法（DSF）表明其在pH 6.0时最稳定，熔解温度（Tm）为54.5°C。
4 讨论
P19是首个报道的感染A. dhakensis的巨型噬菌体，其大基因组可能增强环境适应性。内溶素P19_358的广谱活性（尤其联合EDTA时）凸显其作为抗菌剂的潜力。与同类噬菌体相比，P19的高热稳定性（耐受60°C）更利于实际应用。需进一步优化内溶素递送系统（如构建artilysin）以提升其穿透革兰氏阴性菌外膜的能力。
5 结论
噬菌体P19及其内溶素P19_358对MDR革兰氏阴性菌（特别是A. dhakensis）展现出高效裂解活性和良好的稳定性，有望用于水产养殖、食品安全和临床治疗的抗菌策略开发。
