1 引言
口腔微生物群落的复杂性仅次于大肠，其定植主要源于舌头。多种细菌、病毒和真菌可影响口面部皮肤和黏膜，破坏天然屏障并引发严重程度不一的病变。在抗生素使用、创伤、口干症等特定条件下，可引发口腔损伤甚至全身感染。白色念珠菌（C. albicans）是口腔中最常检出的酵母样真菌，占人类念珠菌病的80%以上。据世界卫生组织数据，约40亿人受疱疹病毒感染，其中HSV-1（37亿例）主要引起口面部感染。口腔HSV-1与白色念珠菌的共感染较为常见，二者可相互作用并加剧彼此症状。目前尚无HSV疫苗，且抗病毒药物存在耐药性问题，促使研究者探索天然化合物等替代疗法。本研究旨在评估一些地中海植物精油及其市售制剂对白色念珠菌和HSV-1的有效性，并探讨其抗炎作用及致敏潜力。
2 材料与方法
2.1 文献检索
通过MEDLINE和Embase进行文献检索，筛选截至2024年5月关于EOs治疗HSV-1的有效性研究。最终纳入21项体外研究，其中11项评估单一EO，10项研究EO混合物。多数研究缺乏EO质量分析（如GC-MS）和统计学分析。
2.2 临床菌株、生长培养基、天然产物
微生物学分析针对三株白色念珠菌：商业参考菌株ATCC 24433，以及两株临床分离株（一株抗伏立康唑和氟康唑CA-FPG1R，一株敏感CA-FPG2S）。研究了14种EOs、两种市售产品（LA和BA）以及自研复方（MIX）。
2.3 抗真菌药敏试验评估
按照CLSI指南，使用Sensititre YeastOne系统测定常见抗真菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。结果显示，耐药临床菌株（CA-FPG1R）对伏立康唑和氟康唑耐药。
2.4 微量肉汤稀释药敏试验
根据EUCAST指南，通过微量肉汤稀释法评估天然化合物的抗真菌效果。测定EOs的MIC和最小杀菌浓度（MFC）。
2.5 植物精油（EOs）配方
根据药敏试验结果，选择四种抗真菌活性最佳的EOs（M. piperita, E. caryophyllata, C. martinii, C. camphora chemotype 1,8-cineole），按照IFRA唇部应用限值混合，制成复方制剂（MIX），与市售疱疹治疗产品（LA）进行比较。
2.6 固相微萃取（SPME）采样
采用顶空SPME技术描述所有EOs和配方的挥发性成分。
2.7 GC-MS分析
使用气相色谱-质谱联用仪分析EOs、EO混合物和LA市售配方的化学成分。通过比对质谱库和线性保留指数进行化合物鉴定。
2.8 嗜碱性粒细胞活化试验（BAT）
使用Flow CAST kit，通过流式细胞术评估MIX、LA及单个EOs的致敏潜力。以CD63阳性细胞百分比超过5%为阳性。
2.9 外周血单核细胞（PBMC）采集与ELISA试验
从健康供体血液中分离PBMCs，培养后用LPS、LA或MIX处理。通过ELISA法检测IL-6、IFN-γ、TNF-α和IL-1β细胞因子的表达水平。
2.10 细胞培养
使用非洲绿猴肾上皮细胞系VERO E6进行体外抗病毒活性验证。
2.11 体外毒性试验
在96孔板中培养Vero细胞，测试不同浓度的LA和MIX（含0.5% Tween 80）的细胞毒性。使用Alamar Blue细胞活力试剂评估细胞存活率。
2.12 体外抗病毒功效试验
在24孔板中培养Vero细胞形成单层，评估LA和MIX在不同处理方式（细胞预保护、病毒直接作用、感染同时处理、感染后处理）下的抗HSV-1活性。通过空斑形成单位减少情况评估效果。
2.13 统计分析
连续变量数据以均值±标准差表示。使用GraphPad Prism v.8软件进行统计分析，Ordinary one-way ANOVA检验，p < 0.05认为有统计学意义。
3 结果
3.1 文献检索
文献分析揭示了EOs抗HSV-1有效性的研究现状，指出多数研究存在局限性，如缺乏化学质量分析和统计学数据。
3.2 抗真菌药敏性评估
药敏试验证实了临床耐药菌株的存在，为后续测试提供了菌株背景。
3.3 微量肉汤稀释药敏试验
在测试的EOs中，M. piperita、T. vulgaris、E. caryophyllata和C. martinii表现出较强的抗真菌活性。市售产品LA主要显示抑制作用，而自研复方MIX显示出抑制和杀菌作用。
3.4 GC-MS分析
通过GC-MS分析了活性EOs及配方的化学成分。例如，C. camphora (1,8-桉叶素型)主要含1,8-桉叶素（68.2%），E. caryophyllata主要含丁香酚（81.1%），而MIX则含有1,8-桉叶素（28.4%）、丁香酚（19.1%）等主要成分。
3.5 嗜碱性粒细胞活化试验（BAT）
BAT结果显示，在测试浓度下，除C. camphora EO在一个过敏志愿者样本中引起活化外，单个EOs及其复方（MIX, LA）均未引起显著的嗜碱性粒细胞活化，表明其局部应用安全性较高。
3.6 细胞毒性试验
在1:1000测试浓度下，市售产品和MIX配方均未对淋巴细胞产生显著细胞毒性作用，表明该浓度可用于后续试验。
3.7 ELISA试验
ELISA检测显示，与LPS单独刺激相比，LA和MIX（1:1000稀释）处理能显著降低PBMCs中促炎细胞因子TNF-α（p < 0.0001）和IL-1β（p = 0.0010）的表达水平，表明其具有抗炎活性。
3.8 体外抗病毒功效试验
空斑减少试验表明，LA和MIX在细胞预保护、病毒直接灭活及感染同时处理阶段均能显著减少HSV-1的空斑形成，显示出抗病毒活性。LA在感染后处理阶段也显示出抑制病毒细胞内复制的活性，而MIX在此阶段效果不显著。
4 讨论
4.1 文献检索
文献分析表明需要更严格的研究来验证EOs的抗HSV-1活性。本研究筛选出有潜力的EOs进行深入评估。
4.2 抗真菌试验
HSV-1患者易合并念珠菌感染。测试证实M. piperita、T. vulgaris等EOs对白色念珠菌（包括耐药株）具有抑制作用。
4.3 EOs选择与MIX配方
基于抗菌、抗病毒、抗炎特性及IFRA安全性标准，研制了MIX复方。其成分符合相关安全浓度限制。
4.4 抗病毒活性（ELISA测试）
体外实验证实LA和MIX均具有抗HSV-1活性。MIX主要通过增强细胞屏障阻止病毒进入，而LA还能抑制病毒细胞内复制。
4.5 抗炎潜力
在HSV-1等感染中，过度炎症有害。研究发现LA和MIX能调节PBMCs的炎症反应，选择性下调TNF-α和IL-1β等关键促炎细胞因子的表达。
4.6 安全性与致敏性（BAT测试）
BAT评估表明，在测试浓度下，EOs个体及其复方（LA, MIX）总体上是安全的。个别成分（如C. camphora）可能对特定个体有致敏性，强调遵循IFRA指南的重要性。
5 结论
研究结果支持使用基于EOs的配方治疗日益常见的HSV-1与白色念珠菌共感染。这些配方不仅具有抗病毒和抗真菌特性，还能调节细胞因子表达，减轻过度炎症反应。标准化BAT结果提示，按照国际指南配制的EO混合物是安全可用的。经过进一步的体内功效和安全性验证，这些天然配方可为管理HSV-1和念珠菌共感染提供有价值的支持。
