铜掺杂的碳点纳米酶用于谷胱甘肽的荧光检测及广谱抗菌应用

时间:2026年1月22日
来源:Microchemical Journal

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基于茶叶和山茱萸的多功能铜掺杂碳纳米点(CuCDNs)通过简易热解-配位法合成,展现出优异的过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶模拟活性,协同铜离子释放实现广谱抗菌(抑菌浓度>100μg/mL)。其铜-生物巯基配位机制构建高灵敏荧光探针(线性范围0.1-220μM,检测限0.0492μM),可区分正常与癌细胞内GSH水平,并在实际食品样本中回收率88.03-103.2%。细胞毒性实验证实1000μg/mL浓度下HMC3细胞存活率>85%,兼具良好生物相容性和细胞成像能力。

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作者:左贺 | 姜琳 | 李明军 | 杨晓鹏 | 侯星宇 | 黄志秋
中国佳木斯市佳木斯大学,邮编154007

摘要

本研究报道了多功能铜掺杂碳纳米点(CuCDNs)作为集成纳米酶平台的开发。与以往报道的系统不同,该材料表现出强大的双酶模拟活性,能够有效调节活性氧(ROS)并具有抗菌能力。在浓度超过100 μg/mL时,CuCDNs对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)具有显著的抗菌效果,这归因于铜离子的释放和酶模拟活性的协同作用。此外,通过利用铜-生物硫醇配位作用,CuCDNs作为一种高灵敏度和选择性的荧光探针,可以通过静态猝灭机制检测谷胱甘肽(GSH),其检测范围为0.1–220 μM,检测限为0.0492 μM。在实际食品样品中的应用中,回收率达到了88.03–103.2%(RSD < 4.4%)。细胞毒性测试证实了其良好的生物相容性,在1000 μg/mL浓度下对HMC3细胞的毒性低于85%。CuCDNs优异的细胞摄取能力和生物相容性有助于实现有效的细胞成像,并区分正常细胞和癌细胞中的内源性GSH水平。总之,作为一种多功能纳米材料,它在先进生物传感、抗菌治疗以及生物医学诊断领域具有潜在应用价值。

引言

纳米酶是一类具有纳米级结构特征的人工材料,能够模拟天然酶的催化功能[1]。与天然酶相比,纳米酶在催化稳定性、环境耐受性和大规模生产的经济可行性方面表现出更好的性能[2]。这些优势使纳米酶能够有效克服天然酶的固有局限性,如易变性和对反应条件的严格要求,从而扩大了其在生物医学[3]、环境监测[4]等相关领域的应用潜力[5]。因此,纳米酶的设计和合成已成为重要的研究课题[6]。在过去十年中,研究人员成功开发了多种具有过氧化物酶类似活性的纳米酶,主要包括金属及其氧化物、碳基材料[7]、结构精确的单原子纳米酶以及高孔隙率的金属有机框架(MOFs)等。
其中,碳基纳米酶由于种类繁多而受到广泛研究,有大量文献报道了碳纳米管和石墨烯等碳材料的合成策略和应用实例[8]。然而,这些材料通常存在一些局限性,例如合成过程中经常需要使用有毒或昂贵的原材料、制备步骤繁琐,导致总体成本较高。为了克服这些缺点,近年来通过绿色和低成本的方法开发高性能碳基纳米酶成为新的研究趋势[9]。目前,主要的碳基纳米酶包括碳纳米管[10]、碳点(CDs)[11]、石墨碳氮化物[12]、氧化石墨烯[13]、空心碳球[14]和介孔碳[15]。基于这些进展,碳点因其独特的光学性质[16]、优异的生物相容性和易于表面功能化[17]而成为非常有前景的纳米材料。为了进一步增强和定制碳点在特定应用中的功能,元素掺杂已成为一种有效的策略。异原子掺杂(如卤素掺杂)可以显著改变电子结构和表面性质。例如,氟和氯掺杂的碳量子点表现出优异的抗氧化活性和良好的生物相容性,这突显了掺杂在调节氧化还原性质以用于生物医学应用(如生物成像)方面的潜力[18]。除了非金属元素外,过渡金属掺杂还引入了新的催化和配位能力。特别是铜掺杂引起了广泛关注。铜离子的引入可以创建活性催化位点并调节电子环境,从而赋予或增强碳点的酶模拟活性[19]。
铜离子的引入不仅能够在碳点内部构建活性催化位点,还能有效调节其局部电子环境,从而赋予或显著增强碳点的酶模拟催化活性。铜作为人体必需的微量元素,在多种天然酶(如Cu/Zn-SOD和酪氨酸酶)的活性中心中起着关键作用[20]。铜丰富的d电子构型和可变的氧化态赋予碳基材料显著的催化潜力和抗菌性能[21]。例如,研究表明Cu₂O纳米颗粒可以通过促进电子转移有效降解H₂O₂或羟基自由基。研究人员通过仿生方法合成了双金属铜/锌纳米酶,并将其整合到温度敏感的水凝胶中。利用铜离子在模拟天然酶活性中心中的关键作用,这些系统实现了多种功能,包括清除活性氧(ROS)、调节炎症、抗菌活性和促进血管生成,从而显著加速糖尿病伤口的愈合[22]。因此,将铜掺入纳米酶不仅增强了它们的自由基清除能力,使其更好地模拟SOD、CAT和GSH-Px等酶的功能,还通过蛋白质类似物的修饰进一步提高了它们的生物相容性和安全性。这些综合特性使碳基纳米复合材料在酶模拟应用中具有显著优势,并表现出优异的酶样活性。此外,铜离子的氧化还原活性和特定亲和力(例如对硫醇基团)使得铜掺杂碳点特别适合选择性检测生物分子(如谷胱甘肽GSH)以及抗菌应用[23]。
谷胱甘肽(GSH)是一种由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽,在人体中普遍存在[24]。它作为一种强效的抗氧化剂和解毒剂,在调节细胞氧化还原稳态中起着关键作用[25]。此外,GSH与多种重大疾病(包括糖尿病、阿尔茨海默病和癌症)有关[26]。高效检测GSH仍然是当前研究的重点,对于这些疾病的早期诊断和治疗具有重要意义。现有的GSH检测方法包括毛细管电泳[27]、电化学技术[28]、质谱与表面增强拉曼光谱联用[29]、比色法[30]和高性能液相色谱[31]。虽然其中一些方法具有高灵敏度,但大多数方法需要较长的样品预处理时间、复杂的程序和高成本,限制了其在快速临床检测中的应用。相比之下,荧光和比色法因其简单性、快速响应和高灵敏度而具有优势,因此应用广泛。基于荧光的方法通常依赖于探针的激发和发射特性,需要能量源进行激发。Yu-e Shi等人开发了一种比率荧光传感器,通过UiO-66-NH2的GSH激活蓝色发射和原位形成的铜纳米簇(UiO-66-NH2@Cu NCs)的聚集增强橙色发射来区分GSH和半胱氨酸[32]。这种独特的双发射响应使得两种结构相似的硫醇能够清晰区分。尽管取得了这些进展,但在单一纳米结构中无缝整合多种酶模拟活性、高效生物传感和抗菌功能的Cu-CDs的合理设计仍然是一个挑战。
基于上述研究背景,本研究报道了使用茶和桂花作为碳和氮源,通过简单的热解-配位方法制备多功能铜掺杂碳纳米点(CuCDNs)的过程。系统研究了制备的CuCDNs的光学性质、抗氧化活性、生物成像能力和抗菌性能。结果表明,CuCDNs不仅保持了良好的荧光发射特性,还表现出优异的双酶模拟活性,能够有效调节ROS。通过结合酶催化和杀菌铜离子释放的协同机制,CuCDNs显示出显著的广谱抗菌效果。此外,基于Cu-S配位作用,该材料还作为一种荧光探针用于检测GSH浓度。它能够准确区分癌细胞和正常细胞中的GSH水平,并在真实食品样品中准确检测GSH,同时保持良好的生物相容性。这项工作突显了合理设计的CuCDNs作为先进生物医学诊断和抗菌应用的多功能纳米试剂的巨大潜力。

实验部分

材料、试剂和仪器详见支持信息。

CuCDNs的表征

CuCDNs呈现不规则的球形形态(图1A),并显示出平均晶格间距为0.271 nm的明显晶格条纹(图1B插图),对应于石墨碳的(11−20)平面,表明其具有类石墨结构。平均粒径为4.35 nm,粒径分布范围为2.25至6.75 nm(图1C)。元素分布图(图1D)显示C、N、O和Cu元素的均匀分布[38],证实了

结论

我们通过简化的两步热解-配位方法开发了多功能CuCDN纳米平台。结果表现出显著的双酶类似活性,有效调节活性氧,并通过协同抗菌机制抑制大肠杆菌(Escherichia coli)。重要的是,铜位点与谷胱甘肽之间的精确配位使得通过静态荧光猝灭实现高度选择性和灵敏的GSH检测。

CRediT作者贡献声明

左贺:撰写初稿、形式分析、概念构思。姜琳:验证、概念构思。李明军:方法学、数据管理。杨晓鹏:形式分析、数据管理。侯星宇:项目管理、资金获取、概念构思。黄志秋:撰写、审稿与编辑、监督、概念构思。

利益冲突声明

作者声明以下可能被视为潜在利益冲突的财务利益/个人关系:侯星宇与黑龙江省的基础科学研究业务有关,包括资金资助。如果还有其他作者,他们声明没有已知的可能会影响本文工作的财务利益或个人关系。

致谢

本工作得到了黑龙江省基础科学研究业务的支持(2024-KYYWF-0538)。

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