肺腺癌作为肺癌中最常见的亚型，长期以来治疗手段有限，尤其对于缺乏驱动基因突变的患者，免疫治疗成为重要方向。然而，肿瘤细胞如何逃避免疫监视仍是未解之谜。近年来，除凋亡外，坏死性凋亡等炎症性细胞死亡形式在肿瘤免疫中的作用逐渐受到关注。受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）作为坏死小体的关键组分，不仅介导细胞死亡，还参与炎症信号调控，但其在肺腺癌中的具体功能及调控机制尚不明确。
研究人员利用TCGA、TRACERx等公共数据库的多组学数据，结合临床样本验证，发现肺腺癌组织中RIPK3表达显著降低，且低表达与患者不良预后相关。机制上，RIPK3下调并非由基因突变或拷贝数变异引起，而是由其启动子及增强子区域的DNA超甲基化及特定上游CpG位点的低甲基化共同导致。此外，负调控因子CASP8的表达上调进一步抑制了坏死小体活性。为明确RIPK3的功能，团队通过CRISPR-Cas9技术构建了Ripk3基因敲除的小鼠模型，发现Ripk3缺失会促进肿瘤进展，并导致肿瘤微环境中CD3+、CD8+T细胞浸润减少，M2型巨噬细胞比例增加。转录组分析进一步证实，RIPK3高表达与免疫相关通路激活密切相关。
关键技术方法包括：基于TCGA、CPTAC和TRACERx队列的多组学数据整合分析；免疫组织化学与组织芯片检测临床样本中RIPK3和MLKL蛋白表达；通过CRISPR-Cas9介导的体内基因编辑构建Ripk3条件性敲除小鼠模型；肿瘤组织免疫细胞浸润的定量分析（如CD3、CD8、F4/80等标志物染色）；DNA甲基化位点与基因表达的关联分析。
RIPK3表达在人类肺癌中逐渐丢失
通过对临床样本的免疫组化分析发现，肺腺癌组织中RIPK3蛋白表达显著低于癌旁正常组织，且低表达患者总生存期更短。转录组数据进一步显示，RIPK3 mRNA在肿瘤组织中下调，晚期患者中表达更低，提示其表达丧失与疾病进展相关。
异常甲基化模式导致RIPK3在肺腺癌中表达抑制
基因组学分析排除了遗传变异对RIPK3表达的显著影响。DNA甲基化检测发现，启动子区CpG位点的超甲基化（如Cluster I、II）及上游特定位点的低甲基化（Cluster III）均与RIPK3转录水平下降相关。同时，负调控因子CASP8的表达上调进一步抑制了坏死小体信号。
Ripk3缺失改变肿瘤免疫微环境
在KrasG12D驱动的小鼠肺癌模型中，Ripk3敲除导致肿瘤组织学分级恶化，且肿瘤内CD3+、CD8+T细胞浸润显著减少，M2型巨噬细胞增多，表明RIPK3缺失削弱了抗肿瘤免疫应答。
Ripk3肿瘤特异性缺失加剧肿瘤负荷
通过AAV9递送sgRNA实现肺上皮细胞中Ripk3的特异性敲除，发现Ripk3缺陷病灶的肿瘤负荷高于对照病灶，且T细胞浸润减少，证实RIPK3在肿瘤细胞中自主性地抑制肿瘤生长并促进免疫细胞招募。
RIPK3表达与人类肺腺癌免疫细胞浸润增加相关
对TCGA和TRACERx数据的分析显示，RIPK3高表达肿瘤中免疫相关通路（如干扰素反应、T细胞活化）显著富集，且细胞毒性T细胞、树突状细胞等免疫群体浸润更丰富，进一步支持RIPK3塑造免疫活性微环境的作用。
本研究系统揭示了RIPK3在肺腺癌中的抑癌功能，其表达受DNA甲基化精细调控，缺失会导致免疫微环境恶化及肿瘤进展。这一发现不仅深化了对炎症性细胞死亡在肿瘤中作用的理解，还为肺腺癌的免疫治疗提供了潜在靶点。通过表观遗传干预恢复RIPK3活性，可能成为增强抗肿瘤免疫的新策略。该研究发表于《Science Advances》，为肺癌及其他实体瘤的联合治疗开辟了新的研究方向。
