引言
随着微创修复技术在儿童牙科中的应用日益广泛,年轻恒牙(尤其是磨牙邻面龋)的龋病患病率仍居高不下,凸显早期诊断与预防策略的重要性。此类龋损进展迅速,常导致大面积病变,甚至引发牙髓炎或根尖周炎。活髓治疗(VPT)作为保留牙髓生物功能的有效策略,适用于因龋损、创伤或医源性操作导致的牙髓-牙本质复合体受损病例。其核心在于利用生物活性材料激活内源性干细胞,促进修复性牙本质形成。
人牙髓干细胞(hDPSCs)因其多向分化潜能(成骨、成软骨、成脂等)成为再生医学研究的热点。钙硅酸盐基材料(如Biodentine XP)具有良好的生物相容性与生物活性,能支持牙髓-牙本质复合体修复。本研究聚焦BD-XP、THPT(树脂改性钙硅酸盐)及新型双固化钙释放材料THB,通过体外实验评估其对hDPSCs的细胞相容性、免疫调节行为(IL-6表达)及成牙/矿化潜能。
材料与方法
hDPSCs取自16–22岁捐赠者的阻生第三磨牙,经流式细胞术鉴定其MSC表型(CD73+/CD90+/CD105+,CD34−/CD45−)。材料浸提液(25%、50%、100%)与细胞共培养后,通过MTT法、细胞周期分析、划痕实验、扫描电镜(SEM)、能量色散X射线光谱(EDX)、ELISA(IL-6)、qRT-PCR(ALP、DSPP、RUNX2、COL1A1)及茜素红S(ARS)染色系统评估生物学效应。
结果
细胞活性与迁移:BD-XP在各浓度下均维持高细胞活性,而THPT未稀释液显著抑制代谢活性(p < 0.001)。细胞周期显示高浓度树脂改性材料引发G0/G1期阻滞,而BD-XP组细胞多处于G2/M期,增殖潜能保留。划痕实验表明BD-XP显著促进伤口闭合,THB未稀释液则延缓迁移(p < 0.01)。
细胞形态与黏附:SEM显示hDPSCs在BD-XP表面形成丰富丝状伪足,EDX证实其钙含量(35.13%)显著高于THB(低钙)与THPT。细胞骨架染色中,BD-XP组F-肌动蛋白结构完整,而高浓度树脂材料组细胞铺展受限。
氧化应激与凋亡:THB未稀释液诱导最高ROS水平,BD-XP仅轻度升高。凋亡实验显示THB未稀释液凋亡/坏死细胞比例最高,BD-XP组细胞存活率最优。
免疫调节与基因表达:所有材料均显著降低IL-6分泌(第3天***p < 0.001)。qRT-PCR显示BD-XP持续上调DSPP、RUNX2(第14/21天)及COL-1(第21天),而THPT/THB无显著差异。ARS染色证实BD-XP组矿化结节数量与面积最大(***p < 0.001)。
讨论
材料组成差异导致生物学响应分化:BD-XP的高钙释放与表面特性支持细胞附着与成牙分化,而树脂成分(如THB中的Bis-GMA)可能通过ROS累积抑制细胞功能。IL-6下调提示材料具抗炎潜力,利于早期愈合。基因表达与矿化结果一致表明BD-XP在促进hDPSCs向成牙谱系分化方面优于树脂改性材料。
结论
BD-XP展现最优细胞相容性、成牙分化诱导能力及矿化潜力,是VPT的理想候选材料。未来需通过体内研究验证其临床转化价值。