在全球健康挑战中，人畜共患的核糖核酸（RNA）病毒感染，如严重发热伴血小板减少综合征（SFTS）和猫免疫缺陷病毒（FIV），持续威胁着动物福利和公共卫生。传统的诊断金标准依赖于从血液样本中检测病毒RNA，这不仅给动物带来采血的疼痛和焦虑，也给兽医等医护人员带来了接触目标病毒及其他血源性病原体的职业风险。尤其在日本，已报告了多起猫向兽医传播SFTS病毒（SFTSV）的病例，甚至包括致死病例，这使得为猫开发更安全的诊断方法变得至关重要。与此同时，FIV作为全球范围内影响猫的主要RNA病毒之一，其早期高效检测对于预防和控制也具有重要意义。虽然已有唾液检测等侵入性较小的诊断方法，但其应用范围仍然有限。近年来，基于皮脂的诊断方法崭露头角，已有研究成功利用商用油吸附膜从人类面部皮脂中检测到SARS-CoV-2的RNA，这为开发一种同样适用于猫科动物的无创诊断策略提供了灵感。
为了回应这一需求，一项发表在《Scientific Reports》上的研究应运而生。研究人员旨在建立一种利用油吸附膜检测猫RNA病毒感染的无创诊断方法。他们假设，这种方法能为猫提供侵入性更小的选择，同时降低兽医和动物护理人员的感染风险。研究的主要目标包括：设计能特异性检测猫管家基因信使RNA（mRNA）并区分人与猫DNA/RNA的引物；优化从猫体表脂质（BSLs）中采集样本的位点和处理方法；评估该方法检测FIV和SFTSV病毒RNA的可行性及灵敏度。
为开展此项研究，研究人员运用了几个关键技术方法：首先，他们从动物医院和宫崎动物保护中心采集了猫的体表脂质样本，使用STF油吸附膜进行非侵入性擦拭收集。其次，他们通过生物信息学工具设计并筛选了针对多个猫管家基因的特异性引物和探针。第三，研究采用了实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）技术，对提取的RNA进行高灵敏度定量检测，并比较了手动与全自动RNA提取方法的效率。最后，研究对样本在不同温度下的稳定性进行了评估，以模拟临床运输场景。实验所用的FIV阳性样本来自动物收容所的无症状携带猫，而SFTSV样本则来自自然感染的猫。
设计并评估用于特异性检测体表脂质中猫管家基因mRNA的引物
为了确认油吸附膜能采集到足够的体表脂质，并避免操作人员污染，研究人员设计了能高效扩增猫RNA同时区分人与猫DNA/RNA的引物。通过对六个管家基因的评估，发现针对Sdha和B2M的引物能稳定地产生较低的阈值循环（Ct）值，且对猫RNA的特异性远高于对人DNA/RNA或猫基因组DNA。在后续的体表脂质样本测试中，B2M被成功检出，而Sdha则未检测到，因此选择B2M作为最优引物，并为其设计了探针用于探针法检测。
优化从猫体表脂质中灵敏检测RNA的样品处理流程
研究人员首先确定了采集猫体表脂质RNA的最佳部位。比较了腋窝、尾根、尾巴和耳朵等部位后，发现耳朵产生的B2MCt值显著低于腋窝，且油吸附膜的颜色变化（大致反映皮脂量）在耳朵部位最明显和最一致。因此，后续实验均使用耳部皮脂。此外，研究评估了全自动RNA提取方法（All Maxwell系统），发现其检测灵敏度高于手动提取方法，故采用自动化方法以提高效率。最后，测试了皮脂样本在不同储存温度（−18°C至37°C）下存放三天的稳定性，结果显示B2M的检测灵敏度没有显著差异，这表明样品可以通过常规物流运输。
高效检测体表脂质中的FIV病毒RNA
在优化采样部位后，研究评估了从耳部体表脂质中检测B2M和FIV RNA的可行性。从12只猫采集的样本中，B2M在所有样本中均被成功检测到。FIV RNA仅在先前通过血液检测诊断为阳性的猫中检出，与常规诊断结果完全一致。更重要的是，通过比较同批六只猫的油吸附膜样本和全血样本，发现皮脂基检测方法的灵敏度与传统全血检测相当。
检测猫体表脂质中的SFTSV RNA
作为最终实验，研究人员探究了是否能从皮脂中检测到SFTSV RNA。他们使用油吸附膜从一只自然感染SFTS的猫的尾根部采集了体表脂质，并成功检测到了SFTSV RNA，而SFTSV阴性的对照猫则未检出。
该研究的结论与讨论部分强调了这项皮脂基诊断方法的重要意义。研究人员成功建立了一种用于检测猫RNA病毒感染的皮脂基诊断方法。该方法的核心优势在于其非侵入性，能用简单的擦拭替代采血，显著减轻了猫的身体和心理负担，符合动物福利的“免于疼痛、伤害或疾病”和“免于恐惧和痛苦”的自由原则。同时，该方法通过降低样本处理过程中接触病原体的风险，提高了猫主人、社区、兽医和兽医护士的生物安全性，契合“健康一体（One Health）”理念。
研究发现，耳朵是采集猫皮脂的最佳部位，且B2M基因的mRNA能稳定地从耳部皮脂中检出，这为将人类医学领域的皮脂mRNA分析技术拓展至猫科提供了生物学依据。与唾液检测、口腔拭子等其他低侵入性方法相比，皮脂采样具有可由单人在自然互动中完成、无需昂贵耗材、压力更小等突出实用优势。
尽管皮脂检测在病原体筛查方面表现出与血液检测相当的灵敏度，但研究人员也指出其局限性：它不能替代血液检测来评估血小板计数、白细胞计数或CD4 T细胞数量等重要的血液学指标。因此，他们提出了一种互补的整合框架，根据临床目标选择性地应用皮脂检测和血液检测。皮脂检测特别适用于采血困难的场景，例如恐惧或具有攻击性的猫、社区猫的大规模筛查、或疑似存在人畜共患病风险的情况。对于收容所的高通量筛查，这种方法因其简单、安全且培训门槛低而具有巨大价值。
总之，这项研究开发的皮脂基诊断方法为检测猫的RNA病毒感染提供了一种微创且可靠的途径。该技术的应用有望增强检测人员的安全性，降低与血液处理相关的风险，并减少与可能携带人畜共患病病原体的猫的直接接触。这些优势共同凸显了皮脂基诊断在临床实践、收容所管理和流行病学监测中的广泛效用，是推进“健康一体”框架的重要一步。未来的工作将侧重于完善采样方案，在不同群体中验证诊断性能，并为兽医和公共卫生专业人员建立标准化指南。
