益芪健脾方通过调节铁蛋白吞噬介导的肝星形细胞衰老，缓解急性加重慢性肝衰竭患者的肝纤维化

陈静|唐向翔|方明东|胡思佳|王娟|陈晓梅|肖倩|王曦|谢芳|谭山中

南京中医药大学附属南京医院中西医结合科，中国南京210003

摘要

民族药理学相关性

急性肝衰竭（ACLF）是一种严重的临床综合征，其特征是慢性肝病的迅速恶化。肝纤维化（LF）显著促进了ACLF病理的发展。中药制剂益气健脾方（YQJPF）对ACLF和LF表现出有希望的治疗效果；然而，其潜在的药理机制和活性成分尚未完全明了。

研究目的

本研究旨在阐明YQJPF在ACLF大鼠模型中治疗肝纤维化的药效学特性、活性成分及其潜在机制，特别关注铁蛋白吞噬作用的激活和肝星形细胞（HSC）的衰老诱导。

材料与方法

通过联合使用CCl4和LPS/D-GalN诱导ACLF大鼠模型，并使用人肝星形细胞（LX2）建立体外模型。利用UHPLC-Q-Orbitrap-MS/MS分析方法鉴定肝脏靶向的活性成分，并通过网络药理学预测关键分子靶点。使用NCOA4 siRNA和ferrostatin-1验证机制的特异性。通过生化检测、组织病理学检查以及分子和细胞分析系统评估治疗效果及相关机制。

结果

YQJPF改善了大鼠的肝组织病理学状况，减轻了纤维化和ACLF。它抑制了LX2细胞的活力和增殖，减少了TGF-β1的分泌，并下调了α-SMA和Collagen I的表达。UHPLC-Q-Orbitrap-MS/MS在鼠肝组织中鉴定出82种肝脏靶向成分（包括50种原型化合物和32种代谢物）。网络药理学揭示了257个潜在靶点，其中135个与肝纤维化相关（核心靶点包括TP53、NCOA4和CDKN2A）。YQJPF诱导了HSC的衰老（上调p16、p21和HMGA1；下调TERT；并触发细胞周期停滞），并激活了铁蛋白吞噬作用（上调NCOA4、Beclin1、LC3BII/I；下调FTH1和p62；增加ROS/铁的积累）。NCOA4敲低或Fer-1处理减少了YQJPF诱导的HSC衰老和抗纤维化效果。

结论

YQJPF通过NCOA4介导的铁蛋白吞噬作用减少ACLF相关的LF，从而促进HSC的衰老。82种肝脏靶向成分和135个重叠靶点突显了其多组分、多靶点的效果，为其临床应用提供了科学依据。

引言

急性肝衰竭（ACLF）是一种严重的临床综合征，表现为已有慢性肝病患者肝功能突然恶化，导致死亡率升高和治疗效果有限（Kulkarni和Sarin，2024）。尽管肝移植是最佳的治疗手段，但由于供体短缺、手术复杂性和高昂的费用，其应用受到严重限制。因此，开发替代治疗策略至关重要（Cotter和Sundaram，2021a）。

新兴证据表明，慢性肝损伤和纤维化是ACLF的重要诱因，使肝脏更容易发生急性失代偿。在此过程中，HSC的激活通过促进过多的细胞外基质（ECM）沉积显著促进了纤维化的进展（Yan等人，2025）。

益气健脾方（YQJPF）是一种基于“预防治疗”原则的“补气健脾”中药方剂，这一整体策略源于《黄帝内经》。在中国，YQJPF作为ACLF的辅助疗法已应用数十年，通过调节气脾平衡来改善肝功能并减少并发症（Lian等人，2015；Wang等人，2021）。根据《中国药典》，该方剂由九种草药组成：Astragalus membranaceus（Fisch.）Bunge（蜜炙）用于补气，Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax & Hoffm.用于健脾，Atractylodes macrocephala Koidz.（炒制）用于祛湿，Angelica sinensis（Oliv.）Diels用于促进造血，Poria cocos（Schw.）Wolf用于利湿，Ligustrum lucidum W.T.Aiton用于抗氧化增强，Citrus reticulata Blanco（陈年）用于调节气机，Scutellaria baicalensis Georgi（酒炙）用于清湿热，Glycyrrhiza uralensis Fisch. ex DC.（蜜炙）用于调和。该方剂通过双向调节作用，针对ACLF的虚实双重病理机制（本虚和标实）。

先前的研究（Tang等人，2021；Wang等人，2021；Zhao等人，2023）表明，YQJPF联合疗法通过减少肝细胞坏死、凋亡和焦亡来改善TBiL、PTA和MELD评分。最近的研究（Yang等人，2024）进一步报道了在CCl4诱导的小鼠模型中YQJPF的微生物群依赖性抗纤维化效果。然而，YQJPF的物质基础和分子途径，特别是其通过铁蛋白吞噬作用和衰老调节HSC的机制仍不清楚。

考虑到ACLF的双重病理机制——既有的纤维化加上急性肝损伤（Choudhury等人，2025；Tyc等人，2023）——我们假设早期干预纤维化可能减轻急性期ACLF的严重程度。为了验证这一假设，我们建立了具有既有纤维化的ACLF大鼠模型，并评估了早期YQJPF干预的治疗效果。此外，我们研究了YQJPF对HSC激活和衰老的影响，重点关注铁蛋白吞噬作用，这是调节铁代谢和活性氧（ROS）稳态的关键过程（Mancardi等人，2021）。最近的研究表明，铁蛋白吞噬作用诱导的HSC衰老可以阻止或逆转纤维化进展（Mancardi等人，2021；Sun等人，2023；Zhang和Xie，2024）。

对肝脏靶向成分和网络药理学的初步分析鉴定了82种肝脏靶向化合物和135个与纤维化相关的靶点，包括NCOA4和CDKN2A。这些发现提示YQJPF通过多组分、多靶点机制发挥抗纤维化作用。具体而言，YQJPF可能激活铁蛋白吞噬作用，诱导HSC衰老，最终缓解ACLF相关的LF。

本研究旨在通过阐明YQJPF在ACLF管理中的抗纤维化机制，为其临床应用提供科学依据。

章节摘录

YQJPF的制备

YQJPF颗粒由九种经过认证的草药按30:30:30:10:10:10:10:10:3的比例混合而成。这些颗粒由南京中医药大学附属医院提供，并由长江药业集团（中国台州）生产。草药成分包括Astragalus membranaceus（Fisch.）Bunge（蜜炙），Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax & Hoffm.，Atractylodes macrocephala Koidz.（炒制），Angelica sinensis

YQJPF中肝脏靶向成分的分析

通过UHPLC-Q-Orbitrap-MS/MS结合先前文献对口服YQJPF的SD大鼠肝脏中的成分进行了分析。总共鉴定出82种化合物，包括50种原型化合物和32种代谢物（图1A-D，补充表3）。

YQJPF在大鼠模型中缓解LF和ACLF

为了探讨YQJPF对慢性肝损伤的护肝潜力，基于已有肝纤维化建立了ACLF大鼠模型（图2A）。

通常，肝损伤与

讨论

ACLF是一种严重的临床综合征，其特征是已有肝硬化患者的肝功能迅速恶化，伴有全身炎症反应、多器官功能障碍和较高的短期死亡率（Kulkarni和Sarin，2024；Piano等人，2023）。LF是慢性肝病进展过程中的一个可能可逆阶段，会加剧ACLF的后果，ACLF的严重程度与纤维化进展的程度密切相关（Akkız等人，

结论

总之，本研究表明，YQJPF通过激活NCOA4介导的铁蛋白吞噬作用，促进HSC衰老并抑制ECM沉积，从而减轻ACLF相关的LF。鉴定出的82种肝脏靶向成分（50种原型化合物和32种代谢物）和网络药理学分析（135个与纤维化相关的靶点）阐明了YQJPF的治疗效果的物质基础。这些结果加深了我们对中医多方面抗纤维化机制的理解。

CRediT作者贡献声明

肖倩：研究。王曦：研究、资金获取。王娟：研究。陈晓梅：研究。陈静：撰写——初稿、验证、方法学、研究、正式分析。谢芳：研究、资金获取。谭山中：撰写——审稿与编辑、可视化、监督、资金获取。唐向翔：研究、正式分析。方明东：研究、正式分析。胡思佳：研究

未引用的参考文献

Cotter和Sundaram，2021..

数据和材料的可获取性

主要数据在正文中或补充材料中提供。如有需要，可提供额外数据。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文工作的竞争性财务利益或个人关系。

资助

本研究得到了江苏省传统中医领军人才项目（编号SLJ0216）、江苏省研究生研究与实践创新计划（KYCX22_2066）以及金陵医院科技创新研究计划（编号2023JCYJZD078）的支持。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文工作的竞争性财务利益或个人关系。

致谢

我们感谢南京中医药大学附属医院临床研究中心提供的技术支持。