摘要：皮下（SC）给予治疗性抗体相比静脉（IV）给药具有诸多优势，包括提高患者便利性及呈现出峰值血浆浓度（Cmax）较低但不影响总体暴露量的药代动力学（PK）特征。这些优势可能同样适用于抗体药物偶联物（ADCs），但其开发一直受到细胞毒性有效载荷可能在SC注射部位滞留并导致局部组织毒性的担忧所限制。本研究在小型猪模型中评估了两种已上市、含有喜树碱类有效载荷的ADC——戈沙妥珠单抗（SG）和德曲妥珠单抗（T-Dxd）——SC给药的局部耐受性和PK特征，分别在不添加和添加重组人透明质酸酶PH20（rHuPH20）的条件下进行。在1–20 mL的注射体积范围内，rHuPH20改善了注射性能、减少了肿胀和返渗，且未引起不良组织学改变。与不加rHuPH20的SC给药相比，添加rHuPH20使总ADC和有效载荷的系统暴露量（AUC）增加了33%–54%，达到IV AUC的52%–80%，同时保持了显著较低的Cmax值（为IV的25%–39%）。在皮肤组织中，rHuPH20使ADC组分的局部滞留减少了41%–87%，提示其增强了弥散并加速了吸收。这些发现表明，rHuPH20能够在紧密模拟人类SC组织结构和淋巴引流模式的动物模型中实现ADC安全、高效的SC递送，提高了系统生物利用度并改善了局部耐受性。由此产生的PK特征可能有助于降低由Cmax驱动的ADC毒性，并优化治疗窗狭窄ADC的给药方案。
抗体药物偶联物（ADCs）代表了靶向肿瘤治疗领域中飞速发展的一类疗法，其将单克隆抗体的肿瘤特异性与化疗药物的细胞毒性 potency 相结合，旨在最大化抗肿瘤疗效的同时降低系统毒性。过去十年间，全球已有十余种ADC获批用于血液系统肿瘤和实体瘤的治疗。然而，当前所有已获批ADC及绝大多数在研ADC均采用静脉（IV）给药途径。相比之下，许多新近获批的单克隆抗体已转向皮下（SC）给药，后者在提升患者便利性、缩短给药时间以及通过降低C
max减轻峰浓度相关毒性等方面展现出显著优势。研究人员推测，ADC也可能从中获益，但此前临床开发一直受限于对细胞毒性有效载荷在SC注射部位滞留导致局部组织毒性的担忧，尤其对于采用美坦辛类（maytansinoid）有效载荷的ADC而言，该类有效载荷具有发泡剂和腐蚀性特征，风险更为突出。目前多数在研ADC采用喜树碱类有效载荷，其效力相对较弱且总体耐受性更佳，这为SC途径的应用提供了潜在基础。
重组人透明质酸酶PH20（rHuPH20）是一种能够解聚透明质酸以瞬时促进液体快速弥散的酶，已使许多原本仅限于IV途径的高剂量生物制剂得以实现患者更倾向于接受的SC制剂给药。联合rHuPH20可加速SC吸收并可能提高生物利用度，这一特性或有助于缩短ADC在注射部位的局部滞留时间。尽管存在上述潜在优势，此前尚无研究在小型猪模型中系统评估SC ADC给药——无论单独给药还是与rHuPH20联合配制——的安全性、局部组织滞留特征或PK表现。小型猪模型因其皮肤解剖结构和生理功能与人类具有高度相似性，被公认为评估SC给药相关.SC组织反应和淋巴引流特性的合适模型。
为填补这一空白，研究人员设计并实施了两项互为补充的评估。第一项为局部耐受性评估，采用具有可水解连接子（hydrolysable linker）的ADC药物SG，比较其与rHuPH20联合或不联合SC给药后的局部反应差异。第二项为PK评估，同时纳入SG和采用不可水解连接子（non-hydrolysable linker）的T-Dxd，设置IV、SC以及SC联合rHuPH20三种给药途径进行对比研究。
在局部耐受性研究方面，研究人员分别开展了1 mL、10 mL和20 mL三种注射体积的实验。1 mL研究中，一只动物 accept了四组含或不含rHuPH20的SG注射液，暴露时间从0.5小时至4小时不等。10 mL和20 mL研究分别纳入三只和六只动物，均采用自身对照设计，在动物腹部对侧分别注射含或不含rHuPH20的SG溶液。所有大体积SC注射均以腹股沟皱褶作为标准化解剖标志，选定下腹部区域进行 consistent 的SC部位给药。注射操作采用25G × 1英寸针头配合标准捏皮技术完成。10 mL剂量采用高容量自动注射器（HVAI）在30秒内完成递送，20 mL剂量则通过注射泵以6.67 mL/min的流速输注。评估指标包括注射持续时间、返渗量（通过预称重眼海绵收集注射后30秒的数据测量）、肿胀（皮丘，bleb）尺寸（采用数字卡尺测量并按半椭球公式计算体积）、以及按五级标准化评分表评定的红斑、肿胀和硬结程度。此外，在研究终点（72小时）采集12 mm打孔活检样本进行组织病理学分析（苏木精-伊红染色，H&E）。
结果显示，联合rHuPH20后，所有剂量水平的注射性能均有所改善：10 mL和20 mL研究中，注射时间缩短10%，注射力降低约48%，返渗量显著减少（10 mL时降低98%，20 mL时降低81%）。在局部组织反应方面，rHuPH20组的皮丘体积和高度均降低，提示 lateral dispersion 增强。红斑、肿胀和硬结评分在rHuPH20组较SG单独给药组降低42%–56%（10 mL研究中rHuPH20组未观察到红斑），且不良反应消退更快，72小时内基本恢复或仅见轻微痕迹。组织病理学检查表明，所有条件下1 mL和20 mL研究的皮肤切片均处于正常范围内，仅见与背景变异相符的轻微偶发改变。唯一异常见于20 mL研究中未联合rHuPH20给药的一只动物，表现为注射部位轻度灶性角化过度和皮下免疫细胞浸润， consistent with 注射压力引起的局部创伤反应；而联合rHuPH20的所有给药部位及其他所有组别的组织学表现均为正常。
在PK研究方面，每种ADC各设IV（每组n=1）、SC（每组n=3）和SC+rHuPH20（每组n=3）三个组。SG以50 mg/5 mL剂量给药，T-Dxd以25 mg/1.25 mL剂量给药。血样通过颈静脉穿刺采集，时间点包括给药前及给药后6、24、48、72、96和168小时；皮肤组织样本于24、48和168小时采集。采用经认证的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血清和皮肤中的总抗体（TAB）、总ADC（TADC）和游离有效载荷浓度。TADC通过酸处理或木瓜蛋白酶消化释放有效载荷后进行测定，并计算总有效载荷浓度（按每分子ADC偶联8个药物分子换算）。皮肤组织浓度以总蛋白含量进行归一化，单位为µg/mg蛋白。
系统暴露量结果显示，两种ADC的TAB血清PK特征均符合SC给药抗体的预期模式。SG的TADC表现出相对较低的SC生物利用度和快于TAB的血清清除，此模式与其药物-连接子不稳定性相符，并得到了同组动物中较高游离SN-38有效载荷结果的佐证。相比之下，T-Dxd的TAB和TADC曲线更为一致，提示其连接子稳定性更佳。SC联合rHuPH20给药较单独SC给药提高了ADC和有效载荷的系统暴露量：SG的TADC AUC从单独SC时占IV的34%提升至52%，T-Dxd从60%提升至79%，增幅分别为54%和33%；总有效载荷AUC相应增加47%和33%。所有分析物的C
max在SC+rHuPH20组均显著低于IV组：SG达到IV C
max的25%–27%，T-Dxd达到39%–45%；按IV等效AUC剂量校正后，SC+rHuPH20的C
max约为IV的50%。TADC/TAB比值分析显示，T-Dxd在各给药途径间保持稳定（IV 87%、SC 85%、SC+rHuPH20 86%），表明循环中抗体的大部分保持了较高的药物偶联完整性；而SG的该比值在IV给药后仅为22%，SC给药进一步降至9%，rHuPH20联合给药部分改善至14%，与SC给药后连接子水解释放有效载荷增加的现象一致。
局部（皮肤）暴露量结果显示，rHuPH20联合给药显著降低了注射部位ADC组分的滞留量。与单独SC相比，rHuPH20使SG的TADC和总有效载荷皮肤AUC分别降低75%和73%，T-Dxd降低41%；相应皮肤暴露量的峰值浓度也显著降低。具体而言，rHuPH20使SG在24小时时注射部位的TADC、总有效载荷和游离有效载荷浓度较单独SC降低87%，T-Dxd降低约50%。
在讨论部分，研究人员首先总结了局部耐受性研究的核心结论：rHuPH20在1–20 mL的体积范围内均实现了良好耐受的SC给药，改善了注射性能并减少局部组织反应，且无不良组织学效应，支持rHuPH20用于促进ADC的SC递送。在PK研究方面，研究人员指出SC+rHuPH20在等效AUC条件下实现了约为IV一半的C
max，这种更为平坦的PK曲线对ADC尤为重要，因为高C
max与间质性肺病、心功能抑制等剂量限制性毒性相关。连接子稳定性是影响SC给药后ADC完整性的重要因素：T-Dxd因采用不可水解连接子而保持了高度的循环完整性，而SG的可水解连接子在SC途径中面临更大的有效载荷提前释放风险，rHuPH20通过加速吸收部分缓解了这一 problem。皮肤组织分析进一步证实，rHuPH20通过促进快速弥散和吸收，显著缩短了ADC组分在注射部位的滞留时间，降低了局部组织暴露于细胞毒性成分的风险，这对于具有狭窄治疗窗的ADC药物具有重要临床意义。
研究结论指出，在小型猪模型中，与rHuPH20联合配制的SC ADC给药安全可行，具有良好的局部耐受性和有利的PK特征。rHuPH20增强了系统生物利用度、减少了局部组织滞留，并在等效AUC下产生了约为IV 50%的C
max。这些改进克服了IV ADC给药的关键局限性，支持将rHuPH20纳入SC ADC制剂开发，以期拓宽治疗窗、优化窄安全范围ADC的给药策略，并在提升患者便利性的同时 potentially 改善疗效-安全性平衡。
