RBM47通过NEDD4L依赖性机制调节TRAF2，从而加剧颈动脉动脉粥样硬化斑块的不稳定性

作者：贾翔、秦正红、刘云润、谭松文、童国祥

湖南省新型药物制剂研发重点实验室，长沙医学院，中国湖南长沙410219

摘要

背景

动脉粥样硬化斑块的不稳定性与血管壁内细胞应激反应和蛋白质稳态的失调有关。RNA结合基序蛋白47（RBM47）可调节mRNA的稳定性和蛋白质表达，但其对斑块稳定性及相关细胞损伤的调控作用尚未完全阐明。

方法

利用动脉粥样硬化的鼠模型和细胞模型，系统评估了RBM47在斑块稳定性相关细胞反应中的作用。生物信息学分析预测NEDD4L和TNF受体相关因子2（TRAF2）可能是RBM47的下游靶点，这表明它们可能参与蛋白质稳态和斑块不稳定性的调控。

结果

在动脉粥样硬化小鼠中，斑块稳定性的降低与细胞应激的增加和RBM47表达的升高相关。同样，在H₂O₂处理的HA-SMCs中，细胞损伤的加剧伴随着RBM47和NEDD4L的显著上调。进一步证实了NEDD4L与TNF受体相关因子2（TRAF2）之间的相互作用。功能分析显示，沉默RBM47可降低NEDD4L的表达，从而减弱NEDD4L介导的TRAF2泛素化和降解。这些分子变化与细胞损伤的减轻、斑块稳定性的改善以及动脉粥样硬化进展的减缓有关。

结论

RBM47通过稳定其mRNA来增强NEDD4L的表达，导致TRAF2蛋白质稳态的改变和斑块不稳定性的增加。这些发现突显了RBM47及其下游信号通路作为动脉粥样硬化干预的潜在靶点。

引言

动脉粥样硬化，尤其是颈动脉粥样硬化，是公共卫生的一个重要关注点，因为它是中风的主要风险因素[1]、[2]。斑块稳定性是动脉粥样硬化进展的关键决定因素[3]。不稳定的斑块容易破裂，引发血栓形成，最终导致严重的脑血管事件[4]。最近的研究表明，动脉粥样硬化斑块内的异常细胞死亡和应激相关细胞损伤与斑块不稳定性密切相关[5]、[6]。这些过程可能损害斑块完整性和血管稳态，从而增加斑块进展和破裂的风险[7]。

RNA结合蛋白（RBPs）在调节细胞功能中起着关键作用[8]。越来越多的证据表明，几种RBPs（如HuR和IGF2BP家族成员）通过调节mRNA稳定性和翻译效率参与动脉粥样硬化的进展[9]、[10]。其中，RNA结合基序蛋白47（RBM47）作为一种新型RBP[11]、[12]，最近被发现显著影响细胞命运决定和功能稳定性[13]。然而，它在动脉粥样硬化中的具体作用，特别是对斑块稳定性的影响，仍很大程度上尚未明确。我们的生物信息学分析表明RBM47可能与动脉粥样硬化斑块不稳定性有关，提示它可能是调节细胞功能的潜在治疗靶点。

神经前体细胞表达发育下调的4样蛋白（NEDD4L），这是一种重要的E3泛素（Ub）连接酶，参与调节多种生理和病理过程[14]。它在细胞信号转导、离子通道调节、细胞应激反应和细胞死亡中起关键作用[15]。然而，NEDD4L在动脉粥样硬化背景下的功能仍大部分未被探索。特别是其在调节细胞死亡和应激相关细胞反应中的确切作用，以及其与RBM47的潜在相互作用，仍不完全清楚。

本研究使用小鼠和人主动脉平滑肌细胞（HA-SMC）模型来研究RBM47和NEDD47在调节细胞应激反应和斑块稳定性中的作用，并探讨它们对动脉粥样硬化治疗的潜在相关性。通过这些分析，我们试图阐明一个先前未被认识的分子机制，为动脉粥样硬化提供新的见解和潜在的治疗靶点。

章节片段

动物建模和分组

从北京Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.购买了6周大的雄性ApoE⁻/⁻小鼠（体重20.5–22.1克），并在SPF条件下饲养。适应一周后开始实验。除对照组外，其他组的小鼠均喂食高胆固醇饮食（HCD；南通Trophic Animal Feed Technology Co., Ltd.）2周，随后使用血管周围颈动脉方法建立易患动脉粥样硬化的脆弱斑块模型

易感颈动脉粥样硬化斑块中RBM47表达上调

本研究使用喂食高胆固醇饮食并结合血管周围颈动脉环放置的ApoE⁻/⁻小鼠来建立动脉粥样硬化模型，该模型表现出与斑块不稳定性相关的某些病理特征。苏木精和伊红（H&E）染色及Masson三色染色显示模型组中明显的动脉粥样硬化斑块形成。定量分析进一步显示，纤维帽区域占斑块总面积的32.78%，坏死核心占18.15%

讨论

动脉粥样硬化是心血管疾病和中风的主要病因因素，给全球带来了巨大的死亡和残疾负担[21]、[22]。虽然目前的治疗策略主要集中在缓解症状上，但它们在阻止斑块破裂和动脉硬化的根本进展方面仍然效果有限[23]。因此，识别新的治疗靶点至关重要。斑块稳定性被广泛认为是...

结论

本研究表明，RBM47在动脉粥样硬化中表达上调，可能通过调节NEDD4L表达和NEDD4L介导的TRAF2蛋白质稳态来影响斑块稳定性。沉默RBM47或NEDD47在体外和体内模型中均与斑块进展的减少和稳定性的改善相关。这些发现表明RBM47–NEDD4L–TRAF2轴可能是动脉粥样硬化斑块不稳定性的潜在调控机制，也是治疗的可能靶点

数据和材料的可用性

本研究中使用和/或分析的数据可从相应作者处获得。

作者贡献

贾翔和谭松文在研究的概念化和设计方面做出了同等贡献。贾翔主要负责数据收集和分析，而谭松文在结果解释和手稿起草中发挥了关键作用。秦正红和刘云润参与了数据分析和解释，并参与了手稿的撰写和修订。他们还对手艺和方法论提供了宝贵的反馈。童国祥...

CRediT作者贡献声明

贾翔：写作 – 审稿与编辑，初稿撰写，验证，资源提供，方法论设计，概念构思。秦正红：写作 – 审稿与编辑，可视化，验证，监督，资源提供，概念构思。刘云润：初稿撰写，资源提供，方法论设计，实验研究，数据管理。谭松文：初稿撰写，验证，监督，资源提供，方法论设计。童国祥：审稿与编辑，初稿撰写，验证

参与同意

不适用。

出版同意

不适用。

伦理批准

所有动物程序均获得了湖南Evidence-based Biotechnology Co., Ltd.机构动物护理和使用委员会的批准（伦理编号：XZ250206），所有动物处理和实验方案均遵循《实验室动物护理和使用指南》中的建议。

代码可用性

不适用。

资助

本研究未获得任何机构或个人的资金支持。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文工作的竞争性财务利益或个人关系。

致谢

不适用。