骨髓免疫微环境重塑CD8+T细胞耗竭表型通过MYC激活介导达雷妥尤单抗耐药机制研究

本研究针对多发性骨髓瘤(MM)治疗中达雷妥尤单抗(Dara)获得性耐药难题，通过单细胞RNA测序(scRNA-seq)和数字空间分析(DSP)技术，首次揭示骨髓免疫微环境中CD8+T细胞耗竭表型通过IFN-γ/MYC轴驱动耐药的新机制。研究人员发现耐药样本中GNLY+/GZMK+ CD8+T细胞扩增伴随MYC调控的核糖体生物合成通路激活，MYC抑制剂(MYCi975)可逆转耐药，为临床联合治疗提供新靶点。

多发性骨髓瘤(MM)作为血液系统第二大恶性肿瘤，尽管抗CD38单抗达雷妥尤单抗(Daratumumab, Dara)显著改善了患者预后，但获得性耐药仍是临床重大挑战。既往研究多聚焦于肿瘤细胞自身CD38表达下调或克隆演化，而对骨髓免疫微环境在耐药中的作用知之甚少。这一领域的研究空白，使得破解耐药机制如同试图解开没有线头的死结。

中山大学肿瘤防治中心的研究团队在《Leukemia》发表的研究中，采用多组学联用策略，首次绘制出Dara耐药过程中骨髓免疫生态系统的动态重塑图谱。研究人员收集6例MM患者配对样本（治疗前vs耐药期），通过10x Genomics单细胞转录组测序分析92,472个细胞，结合GeoMx数字空间分析技术，发现CD8⁺T细胞耗竭表型扩增与MYC激活构成耐药核心机制。关键实验技术包括：单细胞转录组测序解析细胞异质性；PrimeFlow RNA流式验证T细胞表型转换；数字空间分析定位肿瘤中心/边缘免疫特征；体外ADCC/CDC实验验证MYC抑制剂增敏效应；NCG小鼠模型模拟临床耐药。

scRNA-seq profiling
分析显示耐药样本中细胞毒性CD8⁺T细胞（GNLY⁺、GZMK⁺）比例显著增加（P<0.001），伴随耗竭标志物TIGIT/LAG3上调。伪时序分析揭示这些细胞处于终末分化状态，持续分泌IFN-γ但伴随功能衰竭。

+T细胞轨迹分析显示耗竭表型在耐药阶段显著增强'>

Neoplastic plasma cells
恶性浆细胞聚类发现9个亚群，耐药样本中簇2/5/7/8显著扩增（P<0.001）。这些亚群高表达核糖体基因（簇2）和细胞周期基因（簇7），SCENIC分析揭示其受MYC调控网络驱动。

Spatial variation
数字空间分析显示肿瘤中心区CD45⁺免疫细胞减少50%，但耗竭评分增加3倍（P<0.05）。关键验证发现MYC过表达使Dara的CDC半数有效浓度(EC₅₀)从58.28μg/ml升至116.08μg/ml（P=0.002），而MYCi975可逆转此效应。

这项研究开创性地提出"免疫压力- MYC激活"双驱动耐药模型：细胞毒性T细胞持续分泌IFN-γ激活MYC，进而通过核糖体生物合成（簇2）和代谢重编程（簇8）促进肿瘤存活。临床转化价值在于：① MYC抑制剂联合方案可使ADCC效率提升189.48%（P<0.001）；② 建立的100基因耐药特征在4个独立队列（n=1827）中预测生存（HR=1.39-4.31）；③ 空间分析指导精准免疫治疗靶向。该成果为逆转Dara耐药提供了全新的干预策略和生物标志物体系。