摘要 LB-A007：针对表达间皮素的实体瘤的非病毒性定向改造HYP218 CAR T细胞 免费

CAR T细胞疗法通过CRISPR/Cas9平台非病毒整合hYP218 CAR序列至AAVS1和PD1位点，有效缓解T细胞耗竭并增强抗肿瘤活性，在卵巢癌、间皮瘤等模型中实现肿瘤完全消退或部分缓解，为实体瘤治疗提供安全高效的递送方案。

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摘要

CAR T细胞疗法已成为癌症免疫疗法中的革命性方法。然而，由于肿瘤微环境（TME）的免疫抑制作用、高昂的生产成本以及细胞因子释放综合征（CRS）等毒性问题，其在实体瘤中的疗效仍然有限。间皮素是一种在卵巢癌、胰腺癌和间皮瘤中高度表达的肿瘤相关抗原，是CAR T细胞疗法的一个有前景的目标。然而，传统的基于病毒的CAR T细胞生产方法存在一些问题，包括插入突变、过度释放细胞因子和T细胞耗竭。我们假设，采用非病毒性的、定向的方法来生成针对间皮素的CAR T细胞可以减少T细胞耗竭，提高细胞毒性，并降低CRS等风险。利用CRISPR/Cas9平台，我们将CAR基因盒插入AAVS1和PD1基因位点，从而构建了非病毒性的hYP218 CAR T细胞。从健康捐赠者体内提取的外周血单核细胞（PBMCs）经过激活后，使用线性DNA模板和Cas9-gRNA复合物进行核转染。我们分析了CAR蛋白的表达情况、PD1基因的敲除效果以及细胞的功能。非病毒性的PD1整合hYP218 CAR T细胞表现出高效的CAR蛋白表达和显著的PD1基因敲除效果。我们通过体外实验评估了这些细胞对抗卵巢癌（OVCAR8）、间皮瘤（RH63）和胰腺癌（KLM）肿瘤的效果，并在NSG小鼠的异种移植模型中也进行了测试。体外实验表明，非病毒性hYP218 CAR T细胞能够几乎完全杀死肿瘤细胞，并产生促炎细胞因子（如IFN-γ和TNF-α）。体内实验中，非病毒性PD1-hYP218 CAR T细胞在OVCAR8和RH63模型中实现了肿瘤的完全消退；在侵袭性较强的KLM模型中，虽然肿瘤消退程度较慢，但与慢病毒hYP218 CAR T细胞的效果相当。AAVS1整合的hYP218 CAR T细胞的抗肿瘤效果略低于PD1整合和慢病毒CAR T细胞。从机制上讲，PD1-hYP218 CAR T细胞保持了类似初始T细胞的表型，并减少了T细胞耗竭相关标志物的表达。本研究强调了非病毒性hYP218 CAR T细胞疗法作为一种可扩展、成本效益高且更安全的策略，在治疗表达间皮素的实体瘤方面的潜力。