摘要7150：ICA-1S靶向蛋白激酶C-ιota以抑制肝细胞癌中的WNT/β-连环蛋白信号通路 免费

肝细胞癌中蛋白激酶C-ι（PKC-ι）通过维持β-catenin稳定性激活WNT/β-catenin信号通路，其特异性抑制剂ICA-1S可诱导凋亡并抑制增殖。实验采用HepG2细胞处理、siRNA敲低及多组学分析，证实ICA-1S通过降解β-catenin、下调Axin-1和LRP6等关键分子阻断信号通路，剂量依赖性抑制细胞生长（最高63%），同时激活凋亡通路（如BIM、Caspase-3上调）。研究为克服传统靶向治疗特异性不足提供新策略。

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摘要

肝癌是美国癌症相关死亡的主要原因之一，对公共健康构成重大威胁。尽管世界卫生组织预测到2030年全球肝癌死亡人数将超过一百万，但在肿瘤药物研发中，肝癌仍然受到有限关注。WNT/β-连环蛋白信号通路的激活是肝细胞癌（HCC）中的一个关键分子事件，大约三分之一的HCC病例中该通路被激活。然而，由于特异性方面的挑战，针对这一通路的治疗手段仍然有限。在这项研究中，我们探讨了非典型蛋白激酶C-ι（PKC-ι）及其特异性抑制剂5-氨基-1-((1R,2S,3S,4R)-2,3-二羟基-4-甲基环戊基)-1H-咪唑-4-羧酰胺（ICA-1S）在调节β-连环蛋白稳定性及抑制肝癌细胞中其信号传导中的作用。我们通过细胞增殖实验、Western blotting、共免疫沉淀和siRNA敲低技术评估了PKC-ι抑制所影响的通路。将HepG2肝癌细胞以每孔8×10⁴个细胞的密度接种，并用ICA-1S（10-50 µM）处理72小时。未处理的孔作为对照。同时，我们使用基于聚合物的转染试剂siTran 2.0以80 nM的siRNA实现了PKC-ι基因的敲低。随后通过Western blotting检测蛋白质表达，并将其结果归一化到β-actin水平。ICA-1S的剂量-反应曲线显示，在处理三天后，浓度为10 µM、20 µM、30 µM、40 µM和50 µM时，细胞增殖分别减少了15%、35%、53%、55%和63%。此外，20 µM ICA-1S处理显著增加了细胞色素C（39%）、Bcl-2（细胞死亡调节因子）（25%）、切割型Caspase-3（24%）和切割型Poly(ADP-ribose)聚合酶（PARP）（24%）的水平，同时降低了总PARP水平（35%），表明存在内在的凋亡反应。ICA-1S降低了β-连环蛋白的稳定性，提示PKC-ι维持了抗β-连环蛋白降解复合体。我们还观察了20 µM ICA-1S对WNT/β-连环蛋白信号通路下游效应因子的影响，结果显示Axin-1上调了53%，disheveled segment polarity protein-3（DVL3）下调了37%，Low-density lipoprotein受体相关蛋白-6（LRP6）及其磷酸化形式（LRP6）分别下调了55%和63%。上皮钙粘蛋白和肿瘤蛋白p53的水平分别上调了41%和13%。本研究证明，ICA-1S通过破坏β-连环蛋白的稳定性并干扰WNT/β-连环蛋白信号通路，能够抑制肝癌细胞的增殖并诱导其凋亡。我们的发现表明PKC-ι是一个有前景的治疗靶点，为进一步开发ICA-1S或相关化合物作为潜在的抗HCC药物提供了支持，这些药物有望克服肝癌治疗中通路特异性的挑战。