3.1 遗传功能缺失筛选鉴定PARG作为结直肠癌的潜在联合用药靶点
研究团队利用包含7296个shRNA的hEPI9文库，在HT29结直肠癌细胞系中开展功能缺失筛选，旨在发现能增强5FU+SN38（FUIRI方案）疗效的染色质调控基因。经过21天IC20 浓度药物筛选和二代测序分析，从912个染色质相关基因中鉴定出352个敏感基因和131个耐药基因。基因本体分析显示，敏感基因主要富集于代谢调控、DNA损伤应答等通路。通过shRNA单独验证，最终锁定包括ATR、MORF4L2、SMARCA5和PARG在内的8个核心基因。其中PARG作为聚ADP-核糖水解酶，负责降解PARP1介导的PAR链，在DNA修复中起关键作用。鉴于PARG抑制剂临床转化潜力及与FUIRI协同作用的未知性，研究选择PARG进行深入机制探索。
3.2 PARG基因编辑增强DNA损伤及对FUIRI（尤其是5FU）的敏感性
采用CRISPR/Cas9技术构建HT29 PARG敲除细胞系，测序证实外显子7区域成功编辑，Western blot显示PARG蛋白完全缺失。功能实验表明，PARG-KO细胞在FUIRI处理后出现显著PAR链积聚，γH2A.X焦点形成增加，提示DNA损伤修复功能障碍。细胞活力检测显示，PARG缺失使5FU敏感性提升33%-70%，但对SN38单药响应不明显。凋亡实验进一步证实，5FU处理后PARG-KO细胞caspase-3剪切增强，而SN38未引发显著差异。通过ARK法检测发现，SN38诱导的DNA-蛋白质交联在PARG-KO细胞中积累受阻，这可能解释其对SN38敏感性的独特反应模式。
3.3 PARG抑制剂PDD00017273与化疗药物协同作用机制
选用高选择性PARG抑制剂PDD00017273（PDD）进行药理验证。MTT实验显示，5μM PDD与5FU、SN38及FUIRI在HT29、DLD1、HT115三株CRC细胞中均产生协同效应（CI<1）。在5FU耐药株HT29-5FUR中，PDD使5FU的IC50 从26μM降至12μM。机制研究表明，PDD处理可模拟基因敲除表型，引发PAR积聚和γH2A.X水平升高。值得注意的是，在PARG-KO细胞中追加PDD未进一步增强凋亡，证实其作用靶点特异性。而另一种抑制剂COH34在CRC模型中未显示协同作用，提示抑制剂选择的重要性。
3.4 体内实验验证PARG缺失增强5FU疗效
因PDD生物利用度限制，研究采用PARG-KO细胞移植瘤模型进行体内验证。裸鼠皮下接种HT29 PARG-KO与NTC细胞后，每周注射50mg/kg 5FU或FUIRI。结果显示5FU在PARG-KO肿瘤中抑瘤率显著提升（TGI差异>15%），而FUIRI组差异无统计学意义。该结果与体外实验中5FU主导协同效应的发现一致，同时提示肿瘤微环境中可能存在代偿机制削弱联合方案优势。
3.5 PARG表达作为预测生物标志物的临床价值
对170例接受FUIRI/FOLFIRI一线治疗的转移性结直肠癌患者组织芯片进行免疫组化分析。61%样本呈PARG阴性表达，其中阴性患者治疗应答率达70%，显著高于阳性组（56%）。生存分析显示PARG阴性患者20个月后生存率显著改善（p=0.01），且肝转移数量≤3个的比例更高（78% vs 58%）。通过KM-plotter数据库验证，低PARG mRNA表达的IV期CRC患者总生存期延长。这些结果提示PARG可能成为化疗疗效预测标志物，但需注意原发灶与转移灶表达异质性对判断的影响。
4 讨论
本研究首次通过系统遗传筛选揭示PARG抑制与FUIRI方案的协同抗肿瘤机制。其作用本质是通过阻断PAR链降解，维持PAR化介导的DNA损伤信号传导，同时破坏核苷酸代谢平衡，最终导致凋亡级联反应激活。与PARP抑制剂不同，PARG抑制不直接阻断DNA修复酶活性，而是通过调控修复蛋白动态平衡增强化疗敏感性。值得注意的是，TP53突变背景可能影响PARG抑制剂的应答模式，这为个体化治疗提供新思路。目前ETX-19477和IDE-161等PARG抑制剂已进入临床Ⅰ期试验，本研究为其在结直肠癌领域的应用提供坚实理论基础。尤其对于占90%以上的MSS型结直肠癌患者，这种基于DNA损伤应答的联合策略有望突破当前治疗瓶颈。
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