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本研究优化了多种癌症来源肿瘤组织的酶解分离流程，通过调整酶类型、浓度及添加Rho激酶抑制剂等条件，显著提高了细胞回收率和肿瘤样球形成效率（约90%成功率）。测序验证显示肿瘤异质性高度保留（基因表达>85%一致性，SNV>95%重叠），并探讨了长期培养的补充因子。该流程为多癌种高质肿瘤样球生成提供了标准化方案。
患者来源的肿瘤类器官（即从分离出的肿瘤组织中培养出的3D器官样结构）是一种强大的转化工具，它将分子分析结果与功能性药物测试联系起来。然而，肿瘤类器官的成功培养在很大程度上取决于预分析环节中的各种因素——如组织处理、运输方式以及酶解过程——这些因素会直接影响细胞的存活率和培养效果。在本文中，我们介绍了一种优化的工作流程和酶制剂，旨在提高细胞产量及其在后续肿瘤类器官培养和功能检测中的适应性。我们对来自结直肠癌、子宫内膜癌、乳腺癌、肺癌以及头颈部癌症的新鲜手术切除组织进行了处理，以评估酶解过程对后续培养的影响。组织样本被收集在含有GlutaMAX™和B-27™补充剂的Hibernate™-A运输缓冲液中，并添加了抗生素和ROCK抑制剂Y-27632，以确保在冰上运输过程中的稳定性。收到样本后，首先用基于Advanced DMEM/F-12的组织处理缓冲液清洗样本，然后进行机械粉碎处理，再进行酶解。通过设计的实验框架，我们评估了不同酶的类型、浓度及其相互作用，测量了细胞产量（细胞数/毫克组织重量）以及在OncoPro™肿瘤类器官培养基中培养7天后的肿瘤类器官形成情况。优化结果表明，初始的细胞存活率并不能预测后续培养的成功与否，因此需要同时考虑细胞存活率和肿瘤类器官生长情况。根据组织类型的不同，胶原酶、DNase、dispase和透明质酸酶等酶具有不同的适用性。虽然在某些酶解条件下获得了较高的细胞产量，但肿瘤类器官的形成受到了影响，这表明组织消化过程与细胞损伤之间存在权衡。大约90%的样本在7天内形成了肿瘤类器官，证明了该优化工作流程的高效率和重复性。通过对配对的组织样本、酶解后的细胞以及第7天的肿瘤类器官进行下一代测序，我们发现癌症相关基因表达具有超过85%的一致性，单核苷酸变异也具有超过95%的重叠性，从而证实了在整个处理过程中肿瘤特性的保持。进一步的研究还探讨了通过在OncoPro培养基中添加额外的补充剂和生长因子是否能够提高长期肿瘤类器官培养的成功率，并确定了几个可能有助于细胞系建立的候选因子。这种集成了组织运输、酶解和培养的综合性工作流程，在多种癌症类型中均实现了最佳的细胞存活率和肿瘤类器官形成效率。这些结果为高质量患者来源肿瘤类器官的制备提供了一个实用且可扩展的框架。
引用格式：
Colin D. Paul, Anthony Chatman, Logan Wilson, Chris Yankaskas, Pradip Shahi Thakuri, Matt Dallas, David Kuninger. 《优化肿瘤组织酶解过程以快速获得高存活率的肿瘤类器官》[摘要]。载于：2026年美国癌症研究协会年会论文集（第一部分：常规摘要）；2026年4月17-22日；加利福尼亚州圣地亚哥。费城（PA）：AACR；Cancer Res 2026;86(7 Suppl):Abstract nr 7521。
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