通过共发酵丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)来增强风味化合物的产生:一种提升朗姆酒发酵液香气的策略

时间:2026年3月20日
来源:Food Bioscience

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共发酵提升龙舌兰酒风味品质及机制研究。通过酿酒酵母与产丁酸梭菌的共发酵策略优化,发现顺序接种(24小时)显著提高总挥发性物质(4633.4±113.5 μg/L)和酯类浓度(2102.13±19.03 μg/L),酯类增加幅度达53.7-159.2%。GC-MS分析表明共发酵增强酯类(如丁酸乙酯)和酮类(如2-乙基-1-丙酮)生成,VIP和OAV分析筛选出12种关键风味代谢物,感官评价证实顺序接种(12小时)具有最佳接受度。该研究揭示了产丁酸梭菌对发酵动力学和代谢组学的调控作用,为发酵食品风味定制提供新策略。

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向莲|廖慧|黄新蕾|夏小乐
教育部工业生物技术重点实验室,江南大学生物技术学院,中国无锡

摘要

自然发酵能为饮料赋予独特的风味,但其不可控的特性往往导致品质不稳定。因此,有针对性的微生物共发酵成为一种关键策略,既能提升风味,又能确保生产稳定性。本研究探讨了在甘蔗糖蜜中同时发酵酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae)和丁酸梭菌Clostridium butyricum)对微生物相互作用及朗姆酒风味发展的影响。纯酵母发酵虽然产乙醇量高,但总酯含量较低。相比之下,共发酵显著提高了酯类物质的含量,且这一含量会随接种时间和比例的不同而变化。顶空固相微萃取-气相色谱-质谱(HS-SPME-GC-MS)分析显示,共发酵增加了挥发性化合物的浓度,尤其是酯类(增加了53.7-159.2%)和酮类(增加了102.7-134.6%)。24小时顺序接种方案获得了最高的总挥发性物质含量(4633.4 ± 113.5 μg/L)和酯类浓度(2102.13 ± 19.03 μg/L)。通过变量重要性分析(VIP)和气味活性值(OAV)分析,确定了12种对果香和花香香气有显著贡献的关键代谢物。定量描述性分析证实,顺序接种的发酵过程产生了更浓郁的果香和花香,其中12小时顺序接种方案获得了最高的感官接受度。总之,丁酸梭菌的共发酵改变了发酵动力学和代谢物分布,增强了风味化合物的多样性和复杂性。本研究为朗姆酒发酵过程中的微生物相互作用提供了新的见解,并为通过共发酵技术提升发酵食品的风味提供了理论和技术指导。

引言

作为世界六大主要蒸馏酒之一,朗姆酒因其独特的感官特性(如果香和花香)而受到消费者的广泛喜爱(Corbion C.等,2023年)。随着市场的扩张,全球朗姆酒市场价值已达170.4亿美元,这得益于年轻消费者对具有多种风味和高感官品质的酒精饮料的需求不断增加(Tinashe M.等,2021年)。为了获得市场认可,生产商开始关注提升产品质量和附加值(Gonçalves L. C. M.等,2022年)。感官质量——尤其是风味——通常是影响消费者选择的主要因素。朗姆酒的风味和香气源自发酵过程中形成的多种有机化合物,这些化合物在蒸馏后仍然保留下来(Gonçalves L. C. M.等,2022年;Laura F.等,2016b年)。因此,朗姆酒的感官特性与其发酵过程密切相关(Amorim J. C.等,2016年)。
参与发酵过程的微生物在很大程度上决定了最终产品的风味和质量(Wang F.等,2024年)。朗姆酒生产中的自然发酵涉及复杂的酵母和细菌群落,这些微生物不仅赋予了独特的风味,但也带来了效率低、污染风险高和品质不稳定等问题(Coelho C.等,2020年;Duarte W. F.等,2011年;Tinashe M.等,2021年)。为了更好地控制发酵过程,一些酿酒厂使用选定的酿酒酵母纯培养株,从而提高了乙醇产量和某些风味化合物的含量(Coelho C.等,2020年)。然而,这种单一培养的产品往往缺乏风味的复杂性和多样性(Amorim J. C.等,2016年)。受自然微生物多样性的启发,多种微生物的共发酵成为一种可行的策略,可以克服单一培养的局限性,同时提高工艺控制能力和产品风味复杂性(Guo L.等,2024年)。例如,在甘蔗酒精生产中,Pichia caribbica UFLA CAF733与酿酒酵母 UFLA CA11的共发酵提高了挥发性化合物的浓度,如乙基苯乙酸酯、芳樟醇和乙基己酸酯,显著增强了香气(Ferreira D. W.等,2013年)。同样,在葡萄酒生产中,使用Oenococcus oeni酿酒酵母的混合培养增加了萜烯、醋酸酯以及短链和中链脂肪酸的乙酯含量,提升了花香和果香(Yang L.等,2024年)。因此,基于自然群落设计协同作用的微生物组合以增强风味的研究和应用已经得到了广泛开展(Malekijahan F.等,2025年;Portugal C. B.等,2016年)。尽管在自然朗姆酒发酵过程中存在少量的非酿酒酵母(如裂殖酵母)和细菌(如丁酸梭菌),它们在风味形成中起着关键作用(Tinashe M.等,2021年),但专门研究朗姆酒发酵系统中微生物之间的协作模式及其与关键风味代谢物形成之间内在关系的研究仍然较少。
将产酸的厌氧细菌与传统的发酵微生物结合使用可以增强挥发性风味化合物的生成。例如,在白酒发酵过程中接种丁酸梭菌已被证明可以促进乙基丁酸酯和乙基己酸酯的合成,从而强化白酒的特征风味(Qiu F.等,2025年)。类似地,将外源丁酸梭菌引入发酵谷物中显著增加了关键风味化合物的含量,提高了酒精浓度,并改善了产品的整体感官质量(Guan T.等,2023年)。受这些发现的启发,一种潜在的朗姆酒生产策略是在发酵过程中利用功能性微生物提供风味前体。这些前体可以被酵母或其他微生物代谢生成酯类,从而可能产生更丰富的挥发性化合物和更丰富的风味。丁酸梭菌是一种在自然朗姆酒发酵中存在的产酸细菌,能够生成丁酸等脂肪酸(Oliveira R. A. d.等,2024年;Qiu F.等,2024年)。这些脂肪酸随后可以与乙醇酯化形成相应的乙酯(如乙基丁酸酯),从而增强朗姆酒的独特香气。因此,将酿造酵母与产酸细菌如丁酸梭菌共发酵是一种改善朗姆酒风味质量的可行策略。
细菌与酿酒酵母共发酵的效果取决于关键的操作参数,尤其是接种时间和比例(Zhang M.等,2022年)。在葡萄酒香气增强方面,同时接种和顺序接种策略都能产生感官接受度更高的产品,其中顺序接种通常效果更明显(Su Y.等,2024年)。例如,先接种非酿酒酵母再接种酿酒酵母的顺序发酵方法已被证明可以促进猕猴桃葡萄酒中挥发性化合物的形成(Sun W.等,2025年)。此外,接种比例是决定发酵质量的关键因素。以1:1的比例顺序接种Metschnikowia pulcherrima酿酒酵母可更有效地提高李子酒中的酯类和萜烯含量,增强其果香特征(Zhang M.等,2022年)。相反,不理想的接种比例可能导致发酵缓慢、异味产生以及混合培养系统的工艺重复性差(Garavaglia J.等,2015年)。以往的研究主要集中在非酿酒酵母和乳酸菌与酿酒酵母的共发酵上。然而,关于在受控条件下丁酸梭菌等专性厌氧菌与酿酒酵母之间的相互作用及其对朗姆酒发酵液理化性质和风味质量的影响的研究尚缺乏系统性的探讨。
本研究系统地研究了在甘蔗糖蜜系统中,酿酒酵母与丁酸梭菌共发酵对朗姆酒风味形成的影响。通过监测发酵动力学和关键理化参数,揭示了丁酸梭菌对酿酒酵母生长、代谢和发酵性能的影响。使用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱(HS-SPME-GC-MS)分析了发酵液的挥发性风味成分。结合感官评估,阐明了共发酵带来的风味和感官属性的差异。本研究深入分析了朗姆酒发酵过程中的微生物相互作用及其对风味质量的影响,为朗姆酒及其他发酵食品的功能性提升和风味定制提供了理论和技术支持。

部分内容片段

菌株

所使用的酿酒酵母菌株为商业活性干酵母(Saccharomyces cerevisiae,Angel Yeast Co.有限公司生产,产品名称:Super Active Dry Yeast),这是一种未标注培养收集编号的工业制剂,因其能高效发酵高糖底物(如糖蜜)而被选中。丁酸梭菌菌株(CGMCC编号8187)来自西安美森生物技术有限公司。

原材料预处理和发酵

使用的甘蔗糖蜜初始浓度为80 °Bx,来自糖厂

确定最佳共发酵策略

虽然细菌与酵母的相互作用能提升发酵饮料的感官质量,但这种改善的程度直接受到接种时间和共培养比例的影响(Garavaglia J.等,2015年)。为了优化共发酵过程,我们研究了丁酸梭菌的共培养比例和在酿酒酵母发酵过程中的接种时间点。与酿酒酵母单培养相比,丁酸梭菌的共发酵降低了乙醇产量(图1)

结论

本研究探讨了纯酿酒酵母发酵和与丁酸梭菌共发酵对朗姆酒发酵的理化组成和感官特性的影响。通过设计的微生物协作模型,实现了酯类产量的提升。丁酸梭菌的接种时间和比例显著影响了共发酵效果。微生物和理化分析表明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

CRediT作者贡献声明

夏小乐:监督、项目管理、资金获取、概念构思。黄新蕾:撰写 – 审稿与编辑、方法学。廖慧:撰写 – 审稿与编辑、监督、概念构思。向莲:撰写 – 初稿撰写、方法学研究、数据整理

未引用参考文献

Agustín和del Olmo, 2003; de Souza等, 2005; Felipe等, 2021; Gonçalves等, 2022; Layton Donovan和Trinh, 2016; Oliveira等, 2024; Seyfried和Granvogl, 2019; Souza等, 2025; Triba等, 2015; Verstrepen等, 2003; Wang等, 2024.

利益冲突声明

本手稿不存在利益冲突,所有作者均同意发表。

致谢

本研究得到了江苏省基础研究计划(BK20252085、BK20251603)和国家自然科学基金(32302030)的支持。

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