基因工程B细胞药物BE-101实现血友病B患者持久活性FIX-Padua的精准治疗

时间：2025年9月8日

来源：Molecular Therapy

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为解决血友病B治疗中活性因子IX（FIX）持久性、可重复给药和剂量调控的临床需求，Be Biopharma团队开发了基于CRISPR/Cas9基因编辑的B细胞药物BE-101。该研究通过AAV6介导的FIX-Padua转基因插入CCR5位点，实现无需宿主预处理的长期疗效，动物实验证实其可持续184天稳定表达且具备线性剂量响应特性，为血友病B提供了突破性治疗策略。

血友病B作为一种X染色体连锁的出血性疾病，患者因凝血因子IX（FIX）缺乏导致终身出血风险。尽管现有基因疗法取得进展，但存在表达水平不可预测、持久性不足且无法重复给药等核心瓶颈。传统蛋白替代治疗需频繁静脉输注，而腺相关病毒（AAV）载体基因治疗存在免疫原性和剂量限制，这促使研究者探索更可控的治疗方式。

Be Biopharma团队在《Molecular Therapy》发表的研究中，创新性地将B淋巴细胞改造为"活体药厂"。研究人员采用CRISPR/Cas9基因编辑系统，通过AAV6载体将FIX-Padua（一种高活性FIX变体）转基因精准插入C-C趋化因子受体5型（CCR5）基因座，利用同源定向修复（HDR）机制实现基因整合。经体外扩增分化的工程化B细胞药物BE-101，在小鼠模型中展现出快速起效（24小时内检测到FIX）和超长持久性（>184天）两大特征。

关键技术包括：1）CRISPR/Cas9介导的CCR5位点基因编辑；2）AAV6载体递送的HDR模板设计；3）B细胞体外扩增与浆细胞分化体系；4）采用NSG免疫缺陷小鼠进行药效评估。研究团队通过深度测序验证了基因编辑特异性，并建立定量PCR方法追踪转基因拷贝数。

【研究结果】

1.
基因编辑效率验证：在CCR5位点实现>80%的编辑效率，转基因插入未影响B细胞活率（>90%）和CD19⁺/CD138⁺亚群比例。
2.
药代动力学特征：单次静脉给药后，FIX-Padua血浆浓度2周达稳态（人类等效剂量5×10⁶ cells/kg），且维持>6个月的治疗水平。
3.
剂量响应关系：二次给药呈现近线性剂量增长（R²=0.98），证实可滴定性优势。
4.
安全性评估：GLP毒理实验显示无载体相关毒性，全基因组测序未检出脱靶效应。

该研究突破性地证明，工程化B细胞可规避AAV载体容量限制和肝靶向依赖性问题。FIX-Padua的持续分泌解决了野生型FIX半衰期短（18-24小时）的缺陷，其比活性（8-10倍于野生型）显著提升疗效。值得注意的是，BE-101无需清髓预处理即可定植，这区别于传统造血干细胞疗法。

讨论部分强调，该平台技术可扩展至其他蛋白替代疗法领域。研究者特别指出，B细胞终末分化为浆细胞后仍保持转基因表达的特性，是其持久性的细胞学基础。相较于肝细胞定向疗法，B细胞药物具有可冷冻保存、允许剂量调整和重复给药等临床优势。这项研究为血友病B乃至单基因疾病治疗提供了全新范式，其技术路线对开发其他长效生物制剂具有重要借鉴意义。