多发性硬化中促炎性c-Met+CD4 T细胞的鉴定及其致病机制研究

本刊推荐：本研究首次系统揭示了c-Met作为CD4 T细胞炎症亚群标志物在多发性硬化（MS）中的关键作用。通过多组学分析证实c-Met+细胞具有高迁移性（VLA-4/LFA-1依赖）和强致炎性（GM-CSF+IL-17+IFN-γ+），在MS患者外周血与脑脊液（CSF）中显著富集且与残疾评分（EDSS）正相关，为靶向治疗提供了新策略。

研究背景与意义

多发性硬化（MS）是一种中枢神经系统（CNS）的慢性炎性脱髓鞘疾病，其特征是效应性CD4 T细胞（如Th1、Th17和Th17.1）与调节性T细胞比例失衡。近年来研究发现，c-Met（肝细胞生长因子受体）在T细胞活化中起关键作用，但其在MS中的具体功能尚未明确。本研究通过多维度分析揭示了c-Met⁺CD4 T细胞在MS患者外周免疫和CNS中的异常分布、功能特性及临床意义。

方法学设计

研究纳入34例未经治疗的MS患者和13例非炎性神经系统疾病（NIND）对照，采集配对的外周血和脑脊液（CSF）样本。采用流式细胞术检测细胞表型，批量RNA测序（RNA-seq）分析转录组特征，并通过体外迁移实验（使用人脐静脉内皮细胞HUVEC模型）评估细胞迁移能力。整合素阻断实验使用那他珠单抗（抗VLA-4）和奥度莫单抗（抗LFA-1）。

c-Met⁺CD4 T细胞在MS外周血中的异常增多

流式细胞分析显示，MS患者记忆性CD4 T细胞（排除CCR7⁺CD45RA⁺初始细胞）中c-Met⁺比例显著高于NIND组（中位数1.98% vs 0.37%，p<0.0001）。该群体偏向Th17.1表型（CXCR3⁺CCR6⁺），且经PMA/离子霉素刺激后高表达TNF-α、GM-CSF、IFN-γ和IL-17，其中IL-17⁺IFN-γ⁺双阳性细胞尤为富集。这表明c-Met标记了具有高度炎症潜能的CD4 T细胞亚群。

转录组学揭示活化与迁移特征

通过RNA-seq比较c-Met⁺与c-Met⁻细胞，发现162个差异表达基因（41个上调、121个下调）。上调基因涉及免疫调节（CD58、IRF4、HLA-DR）、趋化因子受体（CXCR6、CCR9）及细胞周期调控（RGCC）。基因集富集分析（GSEA）显示，c-Met⁺细胞中细胞周期通路（NES=1.97）和整合素介导的黏附通路（如PID_Integrin_CS, NES=2.2）显著激活。流式验证进一步证实其高表达HLA-DR/CD38和CD69，提示持续活化状态。

增强的迁移能力与整合素依赖机制

c-Met⁺细胞高表达VLA-4（Itgα4β1）和LFA-1（ItgαLβ2），在Transwell实验中显示出更强的跨内皮迁移能力（CXCL12趋化）。经那他珠单抗或奥度莫单抗预处理后，迁移被显著抑制，且对c-Met⁺群体抑制作用更显著。值得注意的是，长期那他珠单抗治疗的患者仍维持高比例c-Met⁺细胞（1.48%），且保持GM-CSF⁺/IFN-γ⁺/IL-17⁺的炎症表型，提示该群体可能逃逸整合素阻断治疗。

HGF/c-Met轴的功能验证

尽管MS与NIND组血浆和CSF中HGF浓度无差异，但外源性HGF处理显著增强c-Met⁺细胞的内皮黏附性和迁移能力（p<0.05），表明该轴直接调控T细胞趋化行为。

CSF中c-Met⁺细胞富集与临床相关性

MS患者CSF中c-Met⁺记忆CD4 T细胞比例显著高于外周血（5.88% vs 1.98%）及NIND组（0.68%），且以Th17.1表型为主。相关性分析发现CSF中c-Met⁺细胞比例与扩展残疾状态量表（EDSS）评分正相关（r=0.52, p=0.002），而外周血中无此关联，提示其CNS浸润与神经功能障碍直接相关。

讨论与展望

本研究确立c-Met作为MS致病性CD4 T细胞的关键标志物，其富集于炎症性CNS compartment并关联残疾进展。该群体兼具强炎性（多细胞因子分泌）和高迁移性（整合素/HGF依赖）特征，且耐受那他珠单抗治疗，为开发靶向c-Met的精准治疗（如细胞清除或信号阻断）提供理论基础。未来需进一步探索其抗原特异性及长期存活机制（如神经营养因子信号协同），以阐明其在MS慢性化中的作用。