随着环境污染加剧和紫外线辐射增强，皮肤光老化已成为现代社会中日益突出的健康问题。长期紫外线暴露不仅导致皮肤皱纹、色素沉着和弹性丧失，还会诱发日光性皮炎、皮肤肿瘤等严重疾病，甚至影响毛囊健康导致脱发。光老化的机制十分复杂，涉及氧化应激、炎症反应、细胞衰老和细胞外基质降解等多重因素。其中，紫外线诱导的活性氧（ROS）爆发是引发皮肤损伤的核心环节，它直接破坏蛋白质、核酸和脂质膜结构，并激活衰老相关分泌表型（SASP），形成炎症与衰老的恶性循环。尽管目前已有一些抗氧化剂和抗炎药物用于缓解光老化，但单一干预措施效果有限，多靶点、整体调节的治疗策略更具潜力。在这一背景下，传统中药复方八子补肾胶囊（Bazi Bushen capsule, BZBS）展现出独特优势。该制剂由菟丝子、枸杞子、五味子、蛇床子、金樱子、覆盆子、韭菜子、川楝子、淫羊藿、巴戟天、肉苁蓉、地黄、川牛膝和人参等十余味中药组成，具有补肾抗衰、多系统调节的临床功效。近年来研究发现，BZBS可通过调节细胞凋亡与自噬平衡延缓皮肤衰老，但其在光老化中的作用机制尚未明确。为此，本研究团队在《Phytomedicine》发表论文，深入探究BZBS对皮肤光老化的改善作用及其分子机制。本研究运用了多种关键技术方法，包括：通过Lgr5-EGFP转基因小鼠建立紫外线照射诱导的光老化模型；采用激光多普勒血流成像、组织病理学检测和生化评价进行表型分析；利用网络药理学筛选潜在化合物与靶点；通过分子对接和生物膜干涉技术（BLI）验证化合物与靶蛋白的结合；采用抗氧化反应元件-荧光素酶（ARE-luc）报告系统、免疫荧光染色、Western blot（WB）和实时逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）等在体外验证KEAP1–NRF2通路的作用；使用siRNA转染技术敲低NRF2表达以验证功能依赖性。研究结果部分，首先通过BZBS alleviates UV-induced pathological changes of skin发现，BZBS和β-烟酰胺单核苷酸（NMN）能有效改善紫外线引起的小鼠皮肤结构和功能退化，促进毛囊生长，抑制炎症细胞浸润。组织学分析显示，BZBS处理组表皮增厚和角化过度显著减轻，胶原纤维和弹性纤维排列更为有序，羟脯氨酸（HYP）含量上升，皮肤屏障蛋白occludin、claudin-1和aquaporin 3表达恢复。在BZBS maintains the normal functions of UV-irradiated HFSCs中，研究人员发现紫外线辐射延长毛囊休止期，导致毛乳头萎缩和毛囊干细胞（HFSCs）增殖分化能力下降。而BZBS处理可增加LGR5+细胞数量，促进EdU掺入和Ki67表达，并上调SHH和GATA3等分化标志物，表明BZBS能维护毛囊干细胞功能。BZBS inhibits inflammatory cell infiltration in photoaging skin部分显示，光老化皮肤中朗格汉斯细胞（CD207+）减少，M1型巨噬细胞（CD80+）和CD4+ T细胞浸润增加，皮肤血流量异常升高。BZBS处理后这些炎症指标显著改善，表明其具有抗炎和免疫调节作用。通过Network pharmacology analysis reveals a comprehensive role of BZBS in treating skin photoaging，研究人员构建了BZBS成分-光老化靶点网络，筛选出50个交叉靶点。GO和KEGG富集分析表明这些靶点显著富集于氧化应激反应、ROS代谢和炎症通路如TNF、IL-17和HIF-1信号。蛋白互作（PPI）网络识别出NRF2（NFE2L2）、HMOX1、NQO1和SOD1等核心靶点。在BZBS alleviated skin oxidative aging by targeting NRF2 signaling pathway中，实验证实BZBS上调皮肤组织中NRF2蛋白表达和核转位，降低氧化DNA损伤标志物8-OHdG和脂质过氧化物MDA水平，提高超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）活性。同时，BZBS减少衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）活性和p16表达，抑制NFKB1、MMP1、TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症因子mRNA水平。体外实验中，NRF2抑制剂ML385可逆转BZBS的抗氧化和抗衰老作用，证明其效果依赖NRF2通路。最关键的部分Verbascoside and epimedin A in BZBS directly binds to KEAP1 and inhibits NRF2 degradation揭示了BZBS的活性成分作用机制。通过UPLC指纹图谱鉴定出14种主要成分，其中毛蕊花糖苷和朝藿定A能剂量依赖性地激活ARE报告基因，促进NRF2核定位，但不影响KEAP1和NRF2的mRNA水平。分子对接显示二者与KEAP1蛋白的ARG-483、LEU-557等关键位点结合，结合能分别为-9.2 kcal/mol和-10 kcal/mol。BLI实验测得毛蕊花糖苷与KEAP1的解离常数（KD）为64.15 μM，朝藿定A为71.90 μM。功能实验表明，二者能降低UVA照射的皮肤成纤维细胞内ROS水平，减少p16表达，上调HMOX1、NQO1和SOD1 mRNA，而这些效应在NRF2敲低后减弱，证明它们通过KEAP1–NRF2通路发挥抗氧化和抗衰老作用。此外，研究还发现BZBS中的异槲皮苷（isoquercitrin）与SIRT1有较强亲和力，且BZBS成分能抑制TNF-α诱导的NF-κB活化，提示其具有多靶点调节潜力。讨论部分强调，本研究首次揭示BZBS通过KEAP1–NRF2轴对抗皮肤光老化的新机制，并鉴定出毛蕊花糖苷和朝藿定A作为新型KEAP1结合剂。与传统单一成分治疗相比，BZBS作为复方中药具有多成分、多靶点、整体调节的优势，能同时缓解氧化应激、炎症反应和细胞衰老，改善皮肤屏障功能和毛囊健康。这为中医药抗衰老研究提供了新思路，也为开发靶向KEAP1–NRF2通路的天然化合物提供了实验依据。结论部分总结，BZBS通过调节KEAP1–NRF2信号通路，有效减轻紫外线引起的皮肤光老化表现，其活性成分毛蕊花糖苷和朝藿定A可直接结合KEAP1，抑制NRF2降解，进而激活下游抗氧化基因表达。该研究不仅证实了BZBS的皮肤保护作用，也为传统中药复方治疗年龄相关疾病提供了科学依据。
