副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一类重要的食源性人兽共患病原体，持续威胁水产养殖系统与食品安全。日益加剧的抗生素选择压力驱动多重耐药菌株快速演化，亟需开发替代抗菌策略，其中噬菌体治疗被视为极具潜力的候选方案。本研究从中国某对虾养殖场污水中分离获得一株靶向多重耐药副溶血性弧菌的噬菌体，命名为Φ170。生物学特性分析显示，Φ170潜伏期为10 min，隐蔽期约60 min，平均裂解量达426 PFU/宿主细胞，且对pH与温度具有广谱耐受性。该噬菌体表现出快速且高效的裂解活性，感染后6 h内即可有效抑制宿主细菌生长。为评估其体内疗效，研究人员采用浸泡法给予斑马鱼噬菌体，评价其对副溶血性弧菌攻毒的预防和辅助治疗潜力。预防组结果显示，Φ170预处理可显著提高斑马鱼72 h存活率。此外，Φ170与盐酸多西环素（doxycycline）联合处理呈现协同效应，能有效降低细菌负荷，缓解肝脏与肠道组织损伤，并抑制过度炎症反应。综上，噬菌体Φ170是预防副溶血性弧菌感染的潜在候选制剂，其与抗生素联用为治疗多重耐药副溶血性弧菌感染提供了有效策略。
本研究针对多重耐药副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus, Vp）在水产养殖中缺乏高效防控手段的问题展开。当前水产细菌性病害防控高度依赖抗生素，长期滥用导致多重耐药（multidrug-resistant, MDR）菌株广泛传播，严重威胁食品安全与公共卫生，开发非抗生素防控技术已成行业迫切需求。噬菌体（bacteriophage, 简称 phage）作为高宿主特异性、可自我复制的病毒，能突破常规耐药机制，被认为是替代抗生素的重要方向，但在水产实际应用中仍面临宿主谱窄、环境稳定性不足及给药策略待优化等挑战。为此，研究人员从江苏某对虾养殖场污水中分离获得一株新型噬菌体Φ170，系统解析其生物学特性，并在斑马鱼（Danio rerio）感染模型中验证其单独使用及与盐酸多西环素（doxycycline）联用的预防与治疗功效，最终证实Φ170是防控多重耐药副溶血性弧菌的优质候选制剂，为水产疫病绿色防控提供了实验依据。本研究发表于《Microbiology Spectrum》。
研究人员采用的关键技术方法包括：从对虾养殖场污水及虾苗样品中分离多重耐药副溶血性弧菌及噬菌体的样本筛选体系；基于双层琼脂法（double-layer agar method）的噬菌体纯化与滴度测定技术；透射电子显微镜（transmission electron microscopy, TEM）形态鉴定技术；一步生长曲线（one-step growth curve）分析潜伏期与裂解量的方法；温度与pH耐受性检测技术；体外裂解动力学监测方法；微量肉汤稀释法（microbroth dilution method）测定抗生素最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）及联合抑菌效应评估技术；以及斑马鱼浸泡攻毒与生存分析模型。
研究结果如下：
- 1.
噬菌体Φ170的形态与宿主谱：透射电镜观察显示Φ170属于长尾病毒科（Siphoviridae），头部直径约56 nm，尾部长度约120 nm。点斑试验表明其对测试的15株多重耐药弧菌中5株副溶血性弧菌具有裂解活性，宿主特异性较高。
- 2.
最佳感染复数（multiplicity of infection, MOI）与一步生长曲线：MOI为0.1时噬菌体产量最高，达1010PFU/mL；一步生长曲线显示潜伏期约10 min，裂解期约60 min，平均裂解量为426 PFU/宿主细胞。
- 3.
温度与pH稳定性：Φ170在30°C至60°C范围内保持稳定，70°C孵育1 h后滴度下降约6个数量级，80°C完全失活；在pH 2至11范围内稳定，pH 1与pH 12条件下完全失活。
- 4.
体外裂解活性及与抗生素的协同作用：体外裂解试验显示Φ170可在感染后3–4 h显著抑制宿主菌Vp94生长并降低活菌数；与多西环素联用时，Vp94的MIC由2 μg/mL降至1 μg/mL，亚抑菌浓度下联合处理可有效阻止细菌反弹。
- 5.
噬菌体Φ170预防性给药降低斑马鱼感染负担：浸泡预处理12 h可使斑马鱼攻毒后72 h存活率由50%提升至90%，显著降低肝脏与肠道细菌负荷及促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达，且噬菌体可在体内增殖。
- 6.
噬菌体-抗生素联合治疗有效降低斑马鱼感染：感染后1 h给药，噬菌体单药、多西环素单药及联合组的存活率分别较感染组提高13.33%、23.33%和43.33%，联合组存活率达90%；联合组在降低组织细菌负荷、抑制炎症反应及维持噬菌体体内增殖方面均优于单药组。
- 7.
斑马鱼组织病理学：感染后12 h，感染组出现肠道黏膜上皮脱落、肝脏水肿与气球样变性；联合治疗组与预防组组织病变显著改善，接近正常对照组；噬菌体单独处理组无显著毒性反应。
讨论部分指出，Φ170属于长尾病毒科，窄宿主谱源于尾部蛋白对特定细菌表面受体的识别，未来可通过构建噬菌体鸡尾酒、定向进化或基因工程改造拓展其宿主范围。噬菌体虽不受常规抗生素耐药机制影响，但细菌可通过受体修饰等方式产生噬菌体抗性，联合抗生素可延缓抗性演化并增强杀菌效果。本研究中多西环素与Φ170的协同机制可能与抗生素破坏细菌代谢促进噬菌体吸附增殖有关。斑马鱼模型中浸泡给药的实际体内感染复数难以直接等同于体外，需进一步优化给药剂量与途径。联合治疗组存活率的显著提升除直接抑菌外，还可能与减轻炎症损伤、保护器官功能及减少对肠道菌群的干扰有关。研究局限性在于Φ170宿主谱较窄、联合机制未完全阐明及水体扩散规律待深入研究，未来将筛选互补噬菌体构建鸡尾酒制剂并解析协同机制。
研究结论表明，噬菌体Φ170裂解活性强、稳定性高，可高效防控多重耐药副溶血性弧菌Vp94感染。其在斑马鱼模型中单独使用具有优异的预防效果，与多西环素联用则显著提升治疗效果，是开发水产疫病噬菌体防控产品的潜力候选，也为多重耐药弧菌感染的防控提供了实验支撑。
