糖基化LGALS3BP作为膀胱癌新型尿液生物标志物与抗体药物偶联物治疗靶点的转化研究

时间：2025年10月6日

来源：Molecular Oncology

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本刊推荐：本研究首次系统揭示分泌型糖蛋白Galectin-3结合蛋白（LGALS3BP）在膀胱癌（BC）诊断与治疗中的双重价值。通过多中心队列验证发现，尿LGALS3BP水平与肿瘤分级显著相关（AUC=0.80），同时开发的新型抗体药物偶联物（1959-sss/DM4 ADC）在移植瘤模型中实现肿瘤完全消退。该研究为膀胱癌液体活检提供了新型生物标志物，并为ADC靶向治疗奠定了 preclinical 基础。

Abstract

膀胱癌发病率已跃居全球第九大常见癌症，本研究聚焦于分泌型糖蛋白Galectin-3结合蛋白（LGALS3BP）在膀胱癌中的生物标志物潜力与治疗靶点价值。通过免疫组织化学、蛋白质印迹等技术手段，发现LGALS3BP在膀胱癌组织中显著高表达，且与疾病进展密切相关。

1 Introduction

膀胱癌（BCa）作为泌尿系统常见恶性肿瘤，2020年全球新增病例约8万例。其分为非肌层浸润性（NMIBC）和肌层浸润性（MIBC）两类，其中NMIBC约占初诊病例70%，但具有高复发和进展风险。本研究探索LGALS3BP这一参与免疫调节、血管生成等多重生物学过程的糖蛋白，作为膀胱癌液体活检新型标志物的潜力。

2 Materials and methods

2.1 Cell lines

采用8种膀胱癌细胞系（包括HT-1376、UM-UC-3等）及神经母细胞瘤SKNAS、头颈癌HOC621细胞系，使用含10%胎牛血清（FBS）的标准培养基培养。

2.2 Immunohistochemistry

采用兔抗人LGALS3BP多克隆抗体（1:400稀释）对福尔马林固定石蜡包埋组织切片进行染色，通过免疫组化评分（IHS）系统量化表达水平。

2.3 Western blotting analysis

使用RIPA裂解液提取细胞蛋白，通过10% SDS/PAGE电泳和抗人LGALS3BP抗体（1:1000）检测蛋白表达。

2.4 Treatment with glycosylation inhibitors

使用Kifunensine（KIF，5μM）、Tunicamycin（TUN，10μg/mL）等糖基化抑制剂处理细胞，分析糖基化修饰对蛋白功能的影响。

2.8 Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

开发基于1959抗体的夹心ELISA法，定量检测血清、尿液及细胞上清液中LGALS3BP浓度，检测下限达1ng/mL。

3 Results

3.1 LGALS3BP在膀胱癌组织中高表达

对29例膀胱癌组织分析显示，100% MIBC患者呈现LGALS3BP高表达（IHS>200），而NMIBC患者仅33%高表达（P<0.0004），表明其表达水平与疾病侵袭性正相关。

3.2 膀胱癌细胞系中LGALS3BP表达特征

Western blot显示所有细胞系均表达70kDa未糖基化形式和100kDa成熟糖基化形式，其中T-24（MIBC）和SW780（NMIBC）细胞分泌水平最高（ELISA检测达200ng/mL）。

3.3 1959-sss/DM4 ADC的治疗效果

在T-24和SW780移植瘤模型中，10mg/kg剂量组ADC治疗实现肿瘤完全消退，且治疗组血清LGALS3BP水平显著低于对照组（P<0.01）。免疫组化显示ADC处理组出现异常有丝分裂象。

3.4 LGALS3BP作为膀胱癌生物标志物的潜力

对64例患者和53例健康对照的尿液分析显示，患者尿LGALS3BP中位数达126.8ng/mL（健康组19.29ng/mL，P<0.0001）。高级别肿瘤患者尿水平（119ng/mL）显著高于低级别（48.13ng/mL）。ROC曲线显示AUC为0.80，灵敏度66.67%，特异性79.25%。

3.5 LGALS3BP糖基化修饰的功能意义

KIF处理诱导的高甘露糖型LGALS3BP对1959抗体反应性增强2.5倍，而商业ELISA试剂盒检测信号降低，证实糖基化模式影响抗体识别特异性。Western blot显示患者尿液存在异常糖基化条带。

4 Discussion

本研究首次同步验证LGALS3BP在膀胱癌诊断与治疗领域的双重应用价值。其尿液检测性能（AUC=0.80）优于现有FDA批准的BTA TRAK等标志物，且糖基化特异性抗体1959可识别肿瘤特异性糖型。1959-sss/DM4 ADC在 preclinical 模型中展现完全抑制肿瘤生长的疗效，为联合免疫检查点抑制剂（ICI）治疗提供了理论依据。